产品简介

本产品采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可凝胶，简便快捷。所配的上层胶带有颜色(红色、蓝色或绿色)，点样孔清晰易辨，方便点样。三种颜色设计，可用于区分含不同样品的凝胶。本试剂盒灌制的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。

本产品配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。

为方便操作，已开盖使用中的改良型促凝剂可置于4℃保存至少三个月。

产品特点

• 快 速 制 备 凝 胶：最短2分钟即可灌制多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释；

• 彩 色 上 层 胶：可制备红蓝绿三种颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利，不影响后续实验；

• 高 性 价 比：最多可制备125块胶，同时适用于变性及非变性蛋白质电泳

• 避 免 异 味：无需使用TEMED，避免恶臭气味；

• 条 带 清 晰：尤其小分子蛋白质条带比在传统凝胶中更清晰。

• Omni-Easy™一步法：具备经典款PAGE凝胶制备试剂盒全部优点的同时，实现一步法灌胶 — 灌制下层胶后直接注入上层胶，无需液封。

• 免染PAGE：无需染胶，蛋白条带可直接紫外曝光成像。

货号规格

产品说明

本产品常温运输；保存于 4℃，其中 改良型促凝剂 保存于-20℃，保质期 18个月。

产品内容

注：同系列产品不同浓度之间只有最大的棕色瓶子（下层胶溶液、下层胶缓冲液）要注意区别，其他瓶子可以通用。

一步法免染PAGE凝胶实验效果

这款产品制备的PAGE凝胶实现了蛋白质在凝胶中的可视化（紫外光下），无需额外的染色和脱色步骤，而且在转印后的膜上依然可见，同时也不会干扰电泳或下游实验步骤。

实验效果图：

                                                                                                      上方为雅酶免染凝胶，下方为进口B品牌免染凝胶，     

可见二者实验效果基本相同     

帮助大家在转膜前判断电泳结果：

免染PAGE凝胶电泳结束后，紫外曝光成像可直接观察凝胶上的蛋白条带，如果出现以下结果，就可以及时调整优化，重新跑电泳了，避免接着转膜走冤枉路。

免染PAGE凝胶还可以帮助大家获知转膜效率：

通过观察转印后的凝胶及膜上蛋白条带，即可判断转膜效率，并发现转膜过程中的一些问题，如产生气泡等。

图一为转印后凝胶(上)和转印膜(下)的紫外成像图，可以观察到凝胶中仍残留有大量蛋白未转印到膜上，提示下次转膜可以延长转膜时间	转印后，膜上的蛋白紫外成像图显示泳道变形，有气泡，转膜质量不佳。

免染PAGE凝胶还可以用于总蛋白内参归一化定量，使用免染总蛋白作为上样内参，可以确保目标蛋白和上样内参均在线性动态范围内，完全消除管家蛋白作为蛋白免疫印迹上样内参所固有的一些问题。

PAGE制胶流程

（以一块 0.75/1.0/1.5 mm 的mini胶为例）

[免染PAGE操作方法与常规凝胶试剂盒步骤一致，Omni-Easy™一步法则灌制下层胶后直接注入上层胶，无需液封]

1. 取等体积 下层胶溶液 和 下层胶缓冲液 ，各 2.0/2.7/4.0mL，混匀；

2. 向步骤1的混合溶液中加入 40/60/80μL 的 改良型促凝剂 ，混匀；

3. 将步骤2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可

（注意：此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于配胶杯中，以判断胶凝固状况)，加入适量水或醇（如异丙醇、正丁醇等）覆盖于下层胶之上；

4. 待下层胶凝固后(约5~10 min)，倒去上层水或醇；注意：当水(醇)和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固。

5. 取等体积 上层胶溶液 和 彩色上层胶缓冲液 ，各 0.5/0.75/1.0mL，混匀；注意：由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。

6. 向步骤5的混合溶液中加入 10/15/20μL 的 改良型促凝剂 ，混匀；

7. 将步骤6的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿；

8. 待上层胶凝固后(约10~15 min)，拔去梳齿即可用于电泳。注意：请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液。

注意事项

1. 本产品制备出的凝胶其上层胶对样品没有浓缩效应，与预制胶类似，但与传统PAGE胶相比，对蛋白条带分离效果更好，小分子量蛋白(比如10 kDa)也可以清晰地分离开，且蛋白条带更窄更锐利；

2. 改良型促凝剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整。加入较多量的促凝剂可加速凝胶，反之亦然；

3. 凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下，温度越高，凝胶速度越快，室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量；相反，如果室温较低，可适当延长凝胶时间；

4. 本产品已加入适量TEMED的替代品，如需进一步加速凝胶，临配胶前可按需补充适量TEMED；

5. 在配胶之前，使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟)，可有效避免凝胶中气泡的形成；

6. 推荐电泳条件为：

经典款PAGE：150V，约50 min(或200V，约35 min)；

Omni-Easy™一步法：150 V，约60 min (或200 V，约45 min)

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

8. 本产品仅限科研使用。

凝胶浓度选择参考

以上为Tris-Glycine缓冲系统中，三色蛋白分子量标准(货号：WJ103)在不同浓度SDS-PAGE凝胶中的电泳示意图

共包含11条蛋白条带(10kDa，15kDa，20kDa，25kDa，35kDa，40kDa，50kDa，70kDa，100kDa，150kDa，250kDa)

此图仅供参考，因温度和pH值等不同，具体情况可能会有所出入。

参考文献

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操作视频

问题解答

Q：使用免染PAGE凝胶会影响蛋白与抗体的结合吗？   

A：不会影响蛋白与抗体的结合，例证如下。

图中样本为L929细胞裂解液，上样量从左至右分别为20μg、15μg、10μg、7.5μg、5μg、2.5μg，

上方为紫外成像的凝胶图，

下方为孵育HRP直标Anti-actin鼠单抗(1:10,000)的WB显影图，可见免染PAGE凝胶不会影响蛋白与抗体的结合。

Q：使用免染PAGE胶电泳需要购买专门的电泳缓冲液吗？   

A：本试剂盒配制的免染PAGE凝胶无需搭配专门的电泳缓冲液，直接使用常规的Tris-Glycine电泳缓冲液即可，但成像步骤需要用到紫外光成像仪。

Q：跑胶结束后可以与玻璃板一起放入成像仪中拍照吗？

A：注意一定要把胶从玻璃板中取出，再放入紫外光成像仪拍照，否则玻璃板会阻碍紫外光激发免染胶发出荧光，而导致拍照失败。

Q.一步法制胶有注意点吗？

A：有的，一步法配胶试剂盒，下层胶倒入玻璃板后，无需液封，直接倒入上层胶，插好梳子，上下层胶会一起凝固。凝固时间10-15分钟左右，一般不超过20分钟，具体凝固时间看促凝剂加的量，包括实验室温度。一步法配胶试剂盒，在倒入上层胶的时候需要左右平移，缓慢倒入，毕竟下层胶是液体，还没有凝固好。如同以前用水或者醇液封一样，左右平移缓慢倒入。另外加入上层胶一定要用移液器操作，直接倒入力度根本不好控制。一步法配胶试剂盒对于小蛋白，条带大多数会更好看。

Q.两步法制胶液封的条件是什么？

A：两步法配胶试剂盒，下层胶倒入玻璃板后，需要水或者醇液封，等5-10分钟左右，一般不超过15分钟，下层胶会凝固。倒掉水或者醇，用吸水纸擦干净，再倒入上层胶。

Q.如果平时自配胶常用8%和12%浓度该如何选择试剂盒？

A：配胶浓度习惯是8%或者12%，和雅酶7.5%或者12.5%是可以通用的。

Q.有客户会担心:不敢换体系，万一用雅酶配胶试剂盒，实验做不出来，怎么办?

A：雅酶配胶试剂盒，还是有Tris-cl、丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺这些组分，只是有替代TEMED的组分，促凝剂是改良的液体，另外上层胶有染料，所以不会对实验有影响，而且上海厂家在2013年就开始卖了，有很多文献都用这款产品。

Q.配胶里面,最毒的是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺,不是TEMED，其实还是有毒的

A：是的，但是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的成分不会挥发，只要戴手套不接触到就可以。TEMED 会挥发，难闻有神经毒性。

Q.制胶无需TEMED,是不是提前把TEMED加到瓶子里面了？

A：雅酶配胶试剂盒里面是有替代TEMED的组分，但不是TEMED，替代品不属于氨类，没有任何难闻的气味，也就没有神经毒性。

Q.雅酶凝胶试剂盒可以用来做非变性胶吗？

A：可以的，雅酶配胶试剂盒不含有SDS，可以做变性胶，也可以做非变性胶。