产品简介
本产品专门用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),包含全套PAGE凝胶制备试剂和配套电泳缓冲液,所配制的凝胶具有类似梯度胶蛋白带型的广谱分离能力(10~250kDa),低、中、高分子量蛋白可均匀分布,无需区分不同浓度下层胶,并且在200V恒压条件下,25min即可完成电泳。
试剂盒采用上层胶和下层胶的预混配方,只需加入改良型促凝剂即可凝胶,灌入下层胶后,无需等待凝胶,直接灌入上层胶即可,简便快捷。所配的上层胶带有颜色(红色、蓝色或绿色),点样孔清晰易辨,方便点样。
本产品配套提供改良型促凝剂,其具有更好的稳定性和催化效能,配胶过程中无需额外添加TEMED。为方便操作,已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少三个月。
产品特点
分离范围广:所配制凝胶具有类似梯度胶蛋白带型的广谱分离能力,无需区分不同浓度下层胶
电泳速度快:200V恒压,25min即可完成电泳
一步法灌胶:灌制下层胶后直接注入上层胶,无需液封
操作简单快速:制胶无需计算所需溶液量,无需稀释
彩色上层胶:可制备红蓝绿三种颜色的上层胶,为点样和区分不同凝胶提供便利
避免异味:无需使用TEMED,避免恶臭气味
制胶流程(以一块0.75/1.0/1.5mm的mini胶为例)
步骤1:
取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液,各2.0/2.7/4.0mL,混匀;
步骤2:
取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液,各0.5/0.75/1.0mL,混匀;
注意:由于染料的特殊理化性质,使用前请摇匀。
步骤3:
向步骤1的混合溶液中加入40/60/80μL的改良型促凝剂,轻轻混匀,将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可;
注意:
①此溶液为过量,请勿全部注入;
②加入改良型促凝剂后,需轻柔混匀,防止过多氧气混入胶溶液,抑制凝胶聚合。
步骤4:
向步骤2的混合溶液中加入10/15/20μL的 改良型促凝剂,轻轻混匀,无需等待下层胶凝固,即可将混匀后的溶液轻缓注入制胶玻璃板中,插入梳齿;
注意:
①灌注上层胶溶液一定要轻缓,避免将上层胶溶液冲入下层胶;
②加入改良型促凝剂后,需轻柔混匀,防止过多氧气混入胶溶液,抑制凝胶聚合。
步骤5:
待胶凝固后(约15min),拔去梳齿即可用于电泳。
注意:
①请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液;
②胶凝固后上下层胶分界线平整度略弱于传统方法配的胶,但对后续电泳没有影响。
电泳
注意事项
1. 本产品所配制凝胶需搭配PG610专用电泳缓冲液使用,不可用其它电泳液替代,否则无法得到理想的电泳结果;
2. 改良型促凝剂的使用量仅作参考,实际用量可根据个人实验习惯和经验调整。凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量;相反,如果室温较低,可适当延长凝胶时间;
3. 在配胶之前,使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟),可有效避免凝胶中气泡的形成;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
5. 本产品仅限科研使用。