UltraSYBR One Step RT-qPCR Kit

一步法RT-qPCR试剂盒

本产品是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒，将逆转录（RT）反应和荧光定量PCR（qPCR）检测在同一管中连续完成。其核心原理是利用SYBR Green I染料掺入法，通过检测与双链DNA结合的荧光信号，实现对RNA模板的定性或定量分析。本试剂盒整合了缺乏RNase H活性的高效逆转录酶和抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶。二者组合既能保证RNA模板的完整性，提高逆转录效率和耐热性，又能通过热启动特性抑制非特异性扩增，显著提高检测的灵敏度和特异性，能通读GC含量高及二级结构复杂的RNA模板。

使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。另外本剂盒中含有通用型ROX参比染料，适配大多数qPCR仪器，部分仪器校正选项选择“None”之后再进行分析。

-20±5℃，避光保存。

Q1：实验重复性差

A1：

(1) 加样体积失准，使用准确度较好的移液枪，扩大反应体系，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中；

(2) 定量PCR仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

(3) 模板浓度太低。模板浓度越稀，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。(4) 做4-6个复孔，删除其中重复性不好的孔，将剩余的进行后续计算。

Q2：如何消除体系中的气溶胶污染?

A2：

(1) 更换新的Mix、引物、模板。

(2) 反应体系尽可能在超净台内操作，减少气溶胶污染。超净台内台面需要定期使用稀释后的84消毒液进行擦拭，使用酒精棉球擦拭移液器，并使用紫外灯照射，以消除长期加样造成的核酸污染。