ELISA 介绍
技术原理:
酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种实验室常用的检测方法, 广泛应用于测量溶液中的分析物(通常是抗体或抗原)的浓度。与其他基于抗体的检测方法不同的是, 酶联免疫吸附实验(ELISA)或酶免疫测定(EIA)通过与固相支持物(通常为聚乙烯多孔板)的结合和系列洗涤步骤, 实现特异性和非特异性相互作用的分离, 并可通过有色产物的形成, 定量分析原始样品中分析物的含量。
ELISA实验快速且简单, 可迅速分析大量平行的样品, 在基础研究、临床前研究和临床诊断实践中广泛使用。
ELISA包括 直接法ELISA , 间接法ELISA , 竞争法ELISA , 夹心法ELISA 。
双抗体夹心法ELISA是最常见的ELISA类型。使用两种特异性抗体将抗原夹在中间,通常称为抗体对。将捕获抗体包被在微孔板上,加入样品,目标蛋白与抗体结合并固定在板上。然后加入偶联的检测抗体,并与靶蛋白上的其它表位结合。加入底物并产生与样品中目标分析物量成比例的信号。双抗体夹心法ELISA需要两种抗体才能与目标蛋白结合,具有高度特异性。
优点:
特异性高,使用的捕获抗体和检测抗体都是检测物特异性的;
灵敏度高,酶标二抗放大检测信号;
适用于复杂样品, 抗原不需进行纯化即可用于检测;
缺点:
适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原;
不能用于小分子半抗原的检测;

双抗体夹心法ELISA原理图
关于四正柏
四正柏一直专注于单克隆抗体和细胞因子检测试剂的开发和生产。ELISA试剂盒已有30年研发工艺积累,确保试剂盒重复性佳、灵敏度高、特异性强、准确度高、回收率好。
提供经过国际标准质控的400多种ELISA试剂盒,能检测人、小鼠、大鼠、猪等多种种属细胞因子,研究领域覆盖免疫学、肿瘤学、神经生物学、发育生物学、氧化应激等,以质优价美的特色畅销国内外市场。除了提供成品试剂盒外,也可以提供定制ELISA试剂盒约150多种。
试剂盒样本类型多样,除了血清、血浆、细胞培养上清外,多种组织匀浆和体液均有文献发表。
目前有1000多篇SCI文献发表,试剂盒也以其高质量发表在《Nature》、《Immunity》等知名期刊上,深受广大客户的一致好评和深度信赖!
目前四正柏生物可提供400余种常用的Elisa检测试剂盒,包括:
■人细胞因子Elisa试剂盒
■小鼠细胞因子Elisa试剂盒
■大鼠细胞因子Elisa试剂盒
■猪细胞因子Elisa试剂盒
■其他生物标志物Elisa试剂盒
部分代表性 ELISA 试剂盒 SCI 文献引用
1. Huang B, Chen Z, ect. Mucosal Profiling of Pediatric-Onset Colitis and IBD Reveals Common Pathogenics and Therapeutic Pathways. Cell. 2019 Nov 14;179 (5):1160-1176.e24. (IF: 41.582)
引用产品: Mouse TNF-α、IL-1β and IL-6 ELISA Kits
2. Shanshan Liu, Chang Liu, Xiaoxi Lv, etc. Thechemokine CCL1 triggers an AMFR-SPRY1 pathway that promotes differentiation of lung fibroblasts into myofibroblasts and drives pulmonary fibrosis. Immunity. Published 17 August. (IF: 31.745)
引用产品: Mouse CCL1/TCA-3 ELISA Kit
3. Li B, Ji P, Peng SY, Pan P, etc. Nitric Oxide Release Device for Remote-Controlled Cancer Therapy by Wireless Charging. Adv Mater. 2020 Apr;32(16):e2000376. (IF: 30.849)
引用产品: Mouse TNF-α and IL-6 ELISA Kits
4. Zou MZ, Liu WL,etc. Artificial Natural Killer Cells for Specific Tumor Inhibition and Renegade Macrophage Re-Education. Adv Mater. 2019 Oct;31(43):e1904495. (IF: 30.849)
引用产品: Mouse TNF-α、IL-6、IL-12p40 and IFN-γ ELISA Kits
5. Li CX, Zhang Y, etc Artificially Reprogrammed Macrophages as Tumor-Tropic Immunosuppression-Resistant Biologics to Realize Therapeutics Production and Immune Activation. Adv Mater. 2019 Apr;31(15):e1807211. (IF: 30.849)
引用产品: Mouse TNF-α ELISA Kit
更多文献引用请点击:四正柏ELISA产品文献列表
四正柏有人、小鼠、大鼠、猪等种属ELISA试剂盒,另外还有人的产前诊断及传染病相关ELISA试剂盒可选。
指标查询办法:ctrl+F,然后再跳出的搜索框中输入关键字或者按照种属快速浏览至目标试剂盒。
ELISA产品列表 http://www.4abio.com/Elisa
| 产品名称 | 规格 |
|---|---|
| Human ELISA | 48/96 wells |
| Mouse ELISA | 48/96 wells |
| Rat ELISA | 48/96 wells |
| Swine ELISA | 48/96 wells |
| Canine ELISA | 48/96 wells |
ELISA辅助试剂
| 编号 | 名称 | 规格 |
| SFQ012 | 包被液 | 100/200/500ml |
| SFQ007 | 标准品 | 支 |
| SFQ028 | 封板膜 | 96孔/96孔*10/96孔*50 |
| SFQ011 | 封闭液 | 10/100/200/500ml |
| SFQ011PF | 无蛋白封闭液 | 10/100/200/500ml |
| SFQ011C | 酪蛋白封闭液 | 10/100/200/500ml |
| SFQ027 | 高吸附酶标板 | 块/块*10 |
| SFQ0103 | 酶结合物稀释液 | 16/100/200/500ml |
| SFQ008 | 浓缩洗涤液(20X) | 25/100/200/500ml |
| SFQ005 | 生物素化抗体 | 支/48T |
| SFQ0102 | 生物素化抗体稀释液 | 16ml |
| SFQ001 | 显色剂/单组份超灵敏TMB | 6ml |
| SFQ0101 | 样本稀释液 | 16/100/200/500ml |
| SFQ009 | 终止液 | 12/100/200/500ml |
| SFQ100 | Elisa辅助试剂盒 | 1/5/10/15块板 |
| SFQ102 | Elisa预包板 | 48孔/96孔 |
ELISA 实验常见问题指南
▌高背景信号
▪ 洗板不充分
对策:洗涤液加满孔,弃液尽量彻底,必要时增加洗涤次数
▪ 链亲和素-HRP结合物浓度偏高
对策:核对说明书稀释比例,按推荐浓度配制
▪ 封闭不充分
对策:确认封闭液,可适当延长封闭时间
▪ 孵育超时
对策:严格把控孵育时长
▪ 样本、标准品含有干扰物质
对策:同步设置空白、阴性对照
▪ 缓冲液污染或变质
对策:更换新鲜缓冲液
▌无信号,几乎不显色
▪ 试剂添加顺序错误、配制出错
对策:复核操作流程,重新配制试剂复测
▪ HRP接触叠氮化物而失活
对策:确认缓冲液不含叠氮钠,更换新试剂
▪ 抗体工作浓度偏低
对策:核对稀释比例,梯度摸索合适浓度
▪ 抗体使用含血清缓冲液复溶
对策:使用配套稀释液配制抗体
▪ 捕获抗体在板上吸附差
对策:选用ELISA专用酶标板,包被抗体用无杂蛋白PBS溶解
▪ 缓冲液污染变质
对策:更换新鲜缓冲液
▌整板均匀发蓝,整体本底偏高
▪ 洗涤不到位、漏洗,残留游离HRP
对策:洗涤步骤不可省略,规范洗板
▪ 底物提前混合,底物活性下降
对策:TMB底物临用前混合,混匀后尽快加样
▪ 封板膜、储液槽重复使用,造成HRP交叉污染
对策:每个孵育步骤更换新封板膜,使用一次性储液槽
▪ 缓冲液存在金属离子或HRP污染
对策:整套缓冲液重新配制
▌标准曲线梯度差,低值分不开、曲线偏平
▪ 链亲和素-HRP用量不足
对策:检查稀释倍数,确认配制无误
▪ 捕获抗体包被吸附效果差
对策:选用ELISA酶标板,包被抗体用无杂蛋白PBS溶解
▪ 检测抗体浓度不足
对策:核对检测抗体稀释比例
▪ 底物孵育时间不够
对策:在说明书允许范围内适当延长底物孵育时间
▪ 操作流程和说明书存在偏差
对策:对照说明书逐项核对操作
▪ 标准品稀释计算错误、梯度失效
对策:重新计算,新鲜配制标准梯度
▌板内重复性差,复孔差异大
▪ 各孔洗涤程度不一致,洗板不充分
对策:保证每孔洗涤体积一致,弃液充分
▪ 酶标板包被不均匀
对策:规范包被、封闭流程,使用专用ELISA板
▪ 封板膜反复使用
对策:每次孵育更换新封板膜
▪ 孵育未封板,孔内液体蒸发
对策:所有孵育步骤加盖封板膜
▪ 缓冲液污染变质
对策:更换新鲜缓冲液
四正柏ELISA文献奖励

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温馨提示:可申请的产品为ELISA、CBA试剂盒和流式抗体。
详见海报细则。
