
关于QuickSwitch™试剂盒及其测定原理
由MBL开发的QuickSwitch™试剂盒是一种允许研究人员使用自己感兴趣的抗原多肽快速制备MHC四聚体的平台。它主要是四聚体形式的重组I类MHC分子,使用时可以自由加载您选择的任何多肽,但前提是该多肽需要与MHC分子有较强的亲和性,即该多肽可以被人或小鼠的免疫系统呈递。加载目的多肽后的四聚体,可以用于检测样本中的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte ,CTL)。

图1. QuickSwitch™试剂盒的原理。QuickSwitch™试剂盒试剂盒中提供的四聚体分子预先结合了Exiting peptide (上图中蓝色)。加入目的多肽(Experimental peptide:上图中红色), 并添加多肽交换因子(PeptideExchange Factor)后,开始进行目的多肽与Exiting peptide的交换反应(反应时间约为4小时)。多肽交换的比例依赖于目的多肽的序列及其与MHC分子的亲和性,试剂盒包含有检测多肽交换效率的试剂。
关于多肽置换效率的测定
QuickSwitch™试剂盒中包含已加载了特定多肽的四聚体分子,这种多肽与四聚体分子的亲和性比较弱,可以被亲和性更强的多肽置换下来。通过将 QuickSwitch™四聚体分子与磁珠结合,并用FITC标记的抗体对结合的MHC分子进行染色(这两种成分均在试剂盒中提供),可以确认是否发生了这种置换。磁珠及荧光信号可以被常用流式细胞平台检测到,检测到的FITC信号的平均荧光强度(MFI)代表完成多肽置换流程后仍与MHC分子结合的QuickSwitch™肽的量。如果反应体系中没有加入其它多肽,预加载到四聚体分子上的多肽没有被置换,则产生的荧光信号值将很高,设定此时的MFIFITC为0%置换。如果将高亲和力的参考多肽(在QuickSwitch试剂盒中为每个可用的MHC等位基因提供)添加到置换反应中,那么它将取代所有QuickSwitch™四聚体分子上的多肽,从而导致检测到的荧光信号值比较低,设定此时MFIFITC为100%置换。任何目的多肽置换反应后的MFIFITC值应在0%置换和100%置换之间,并可以由此计算出每一个目的多肽的置换率。如果一条多肽的置换率达到了90%以上,则表明该多肽可以被免疫系统呈递。

图2.多肽置换效率的测定
QuickSwitch™试剂盒使用文献
