诺扬生物

【海星】CRISPR文库体内(in vivo)筛选服务

诺扬生物

2025-11-06

一、CRISPR文库筛选体内(in vivo)应用

CRISPR文库筛选（CRISPR library screening）在体内（in vivo）应用主要聚焦于在动物模型或生理环境中高通量鉴定基因功能、疾病机制和治疗靶点。这种方法通过引入基因编辑库到活体组织中，模拟复杂生物系统（如免疫响应、组织微环境），相比体外筛选更接近人体生理状态。主要方向包括以下几个方面：

1.癌症研究：这是体内CRISPR筛选最广泛的应用方向，旨在揭示肿瘤发生、进展和治疗响应机制。重点包括鉴定肿瘤依赖基因、转移驱动因子、药物抵抗机制以及免疫逃逸途径。通过移植模型或直接体内编辑（如AAV病毒递送），筛选可模拟肿瘤微环境。

2.感染性疾病：用于发现宿主-病原体相互作用的关键基因，特别是病毒感染的宿主因子。筛选帮助识别病毒复制必需的细胞途径，支持抗病毒药物开发。

3.免疫学与免疫治疗：探索免疫细胞（如T细胞）中的基因调控网络，鉴定增强癌症免疫治疗的靶点。体内筛选考虑免疫系统完整性，揭示肿瘤与免疫细胞的交互。

4.心血管疾病：探究胆固醇代谢、炎症和心脏发育相关基因，支持动脉粥样硬化等疾病的机制研究和靶点发现。

5.神经科学与发育生物学：分析神经元功能、发育过程和相关疾病（如自闭症）基因，结合单细胞读出技术揭示复杂表型。

6.代谢与内分泌疾病：如糖尿病研究，鉴定调控胰岛素分泌或代谢通路的基因。

7.其他细胞过程：包括自噬、信号通路和药物毒性研究，扩展到多基因交互和合成致死分析。

这些方向的优势在于生理相关性高，能捕捉体外难以模拟的交互（如细胞-细胞接触、免疫响应）。挑战包括递送效率低、离靶效应干扰结果准确性和库覆盖率不足易遗漏关键基因。未来前景明确，随着单细胞测序和改进递送（如纳米载体）的整合，将加速精准医学应用。

二、CRISPR文库体内(in vivo)筛选服务

海星生物CRISPR文库筛选体内服务利用先进的基因编辑技术结合动物体内验证CRO平台，帮助您高效鉴定关键基因在体内环境中的功能。通过构建高覆盖率文库并结合动物模型，我们提供从文库设计到数据分析的全流程支持。适用于肿瘤、免疫和代谢等领域的研究，加速药物靶点发现。服务简单高效，交付周期仅10-24周。全程一对一专家团队支持，协助制定方案。

▍细胞文库构建流程

标准化流程，确保文库多样性>95%和均匀覆盖。步骤如下：

1. 文库设计：根据您的靶基因列表（单基因或全基因组），使用算法优化sgRNA序列（每基因4-10个sgRNA）。

2. 寡核苷酸合成：合成高纯度寡核苷酸池，包含U6启动子驱动的sgRNA。

3. 载体克隆：将寡核苷酸池克隆入慢病毒载体（如lentiCRISPR v2），转化E. coli产生质粒库。

4. 细胞转导：使用慢病毒转导目标细胞系（如HEK293或原代细胞），MOI=0.3控制覆盖率。

5. 验证与扩增：NGS测序验证文库完整性，扩增至10^8-10^9细胞规模。

输出：冻存细胞文库 + 验证报告。

▍移植模型构建流程

基于您的需要的小鼠模型，构建可靠的体内筛选平台，确保移植成功率>90%。步骤如下：

1. 动物准备：选择对应小鼠（如B6、NSG）不同的处理以适应移植。

2. 细胞移植：静脉或皮下注射文库细胞（1-5×10^6细胞/侧），分组设置对照（非靶向sgRNA）。