诺扬生物

【杂交瘤细胞无血清培养基   规格与保存】

产品描述

杂交瘤细胞无血清培养基

【杂交瘤细胞无血清培养基   用途与描述】
1、杂交瘤细胞无血清培养基可用于小鼠杂交瘤细胞的培养。一般不需驯化，可直接转入杂交瘤细胞无血清培养基中。
2、杂交瘤细胞无血清培养基也可用于大鼠及仓鼠杂交瘤细胞培养，但一般需要驯化，方可适应无血清的培养环境。
3、杂交瘤细胞无血清培养基中蛋白含量低，有利于表达抗体的纯化。
4、杂交瘤细胞无血清培养基内毒素低于0.25EU/mL，减少了腹水条件下困难的内毒素去除操作。
5、三种适合不同生产用量的配套工艺（摇瓶、透气袋、生物反应器）

杂交瘤细胞是将免疫的小鼠脾淋巴细胞（B细胞）与小鼠骨髓瘤细胞融合在一起，该细胞既具备细胞能够产生特异性抗体的特性，又具备肿瘤细胞能够无限传代（永生性）的特点。因此通过杂交瘤细胞的不断传代，就会得到所需种类的单克隆抗体。

在杂交瘤细胞株培养的后期添加杂交瘤培养基抗增剂，可以刺激单克隆抗体表达。

【杂交瘤细胞无血清培养基   主要成分】
杂交瘤细胞无血清培养基主要成分：氨基酸，无机盐，人白蛋白，转铁蛋白，胰岛素，微量元素等。

【杂交瘤细胞无血清培养基   实验数据】

一、杂交瘤细胞不同培养方式细胞数量与抗体产量对照表（1号细胞株）

静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度7.0x104/mL。连续7天不换液培养。
摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度7.0x104/mL。连续7天不换液培养。

二、杂交瘤细胞不同培养方式细胞数量与抗体产量对照表（2号细胞株）

静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度4.0x104/mL。连续7天不换液培养。
摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度4.0x104/mL。连续7天不换液培养。

三、三种适合不同生产用量的配套工艺（摇瓶、透气袋、生物反应器）的培养数据

1、培养瓶静态培养数据
1号细胞株


培养瓶静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度3.5x105/mL。连续7天不换液培养。

培养瓶静态细胞峰值：1.282x106/mL
培养瓶静态抗体峰值：329.5mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

2号细胞株


培养瓶静态培养条件：T25培养瓶，5mL培养基。细胞接种密度2.6x105/mL。连续7天不换液培养。

培养瓶静态细胞峰值：1.335x106/mL
培养瓶静态抗体峰值：390mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

2、摇瓶培养数据

1号细胞株


摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度7x104/mL。连续7天不换液培养。

摇瓶细胞峰值：2.185x106/mL
摇瓶抗体峰值：510mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

2号细胞株


摇瓶培养条件：125mL摇瓶，30mL培养基，转速90rpm。细胞接种密度4x104/mL。连续7天不换液培养。

摇瓶细胞峰值：1.588x106/mL
摇瓶抗体峰值：521mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

3、2L培养袋培养数据（静态培养）
1号细胞株


培养袋静态培养条件：2L培养袋，1L培养基。接种密度3.4x105/mL。连续9天根据密度补液培养。

培养袋细胞峰值：2.542x106/mL
培养袋抗体峰值：480.3mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

2号细胞株


培养袋静态培养条件：2L培养袋，1L培养基。接种密度2.0x105/mL。连续9天根据密度补液培养。

培养袋细胞峰值：2.170x106/mL
培养袋抗体峰值：522.5mg/L（检测方法：小鼠IgG   Elisa检测）

四、与现有国外品牌的部分对照数据

细胞密度方面：Yocon培养基最高细胞密度为1.282x106/mL，*****培养基最高细胞密度为1.370x106/mL。最高细胞密度确实差异不大。
细胞倍增时间方面：Yocon培养基第2天即达到了细胞密度峰值，*****培养基第3天达到细胞密度峰值。细胞倍增时间差异显著。

抗体表达方面：
1号细胞株。Yocon小鼠IgG抗体表达量峰值为329.5mg/L，相比*****的240.0mg/L。多出37%。差异明显。     

【杂交瘤细胞无血清培养基   使用前特别提示】

1. 杂交瘤细胞无血清培养基的使用方法与血清培养基及血清替代物培养基相比，确有差别。

敬请用户仔细查看杂交瘤细胞无血清培养基产品使用说明书后操作，请勿仅以既往经验使用本产品。
与血清培养基相比，本产品在培养某些杂交瘤细胞时，需提前进行驯化。

1) 对于采用血清及血清替代物培养的杂交瘤细胞，在初次使用Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基时，为防止培养环境的剧烈变化对
细胞造成的损伤，需要对细胞进行驯化操作。
首次更换为Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基时，需要在其中添加原培养方法中等量的血清或者替代物。在此后的两次细胞传代中，
依次减半血清或者替代物的浓度。第三次传代，直接离心取上清，更换为Yocon 杂交瘤细胞无血清培养基，完成驯化过程。
2) 对于采用无血清培养基培养的杂交瘤细胞，可以直接更换为本产品进行换液和传代操作，无需经历驯化过程。

2. 使用培养基静态培养和动态培养的不同之处

静态培养：如客户静态培养，可直接使用本培养基，无需做任何处理
动态培养：如客户动态培养，需额外添加0.1%PLURONIC F-68，防止在搅拌培养中，剪切力对细胞的损伤。如未添加防剪切力
保护剂，细胞生长不佳，甚至死亡。

【杂交瘤细胞无血清培养基   使用方法】

见《杂交瘤细胞无血清培养基产品使用说明书》（请联系客服）

【提供生物反应器级别的杂交瘤细胞大规模培养技术方案】

友康生物拥有先进的无血清培养基全套开发装备，包括进口生物反应器、高效液相色谱仪、生化分析仪、流式细胞仪等。 借助这些装备，我们可以迅速、有效的为用户定制基于客户需求的的杂交瘤无血清培养基。综合成本显著低于现有的DMEM+10%血清的形式。 我们已经为全国的多家生产企业提供了技术服务。

我们可为您构建无血清平台提供如下技术支持： 1、现成可用的生物反应器培养工艺，包括反应器整体运行参数、溶氧、气体组合、补料策略等。 2、提供生物反应器条件下1L、5L、10L、50L的大规模培养工艺。并可便利的升级到50L及500L。 3、为大规模生产企业提供基于细胞株的个性化杂交瘤细胞培养基的定制，包括基础培养基及补料培养基。

【杂交瘤细胞无血清培养基   产品质量】

友康生物是否值得信赖？

友康生物专注于无血清培养基产品的研发与生产。

2014年，推出了免疫细胞无血清培养基
2015年，推出了MDCK细胞无血清培养基
2016年，推出了杂交瘤细胞无血清培养基、Hela细胞无血清培养基
2017年，推出了MSC无血清培养基、293细胞无血清培养基、CHO细胞无血清培养基

产品质量如何？

产品无菌率
绝非夸大，自2014年将培养基灌装由手工灌装改为全自动液体培养基生产线灌装以来，从未发生过1瓶培养基污染的情况。

内毒素低于0.25EU/mL
自引进专门的内毒素去除设备后，产品内毒素均低于0.25EU/mL。

产品品质的硬件保障

1000L及250L配液罐

培养基全自动灌装线

客户问答

1、杂交瘤细胞初次培养及复苏效果不佳，如何解决此问题？

      答：请先按照本公司驯化适应程序进行细胞驯化，驯化后的细胞即可完全适应本公司的无血杂交瘤细胞系种类繁多，并不是所有的细胞系都能直接适应无血清培养基，如无法适应培养基。
复苏问题：如冻存的杂交瘤细胞活率较低，复苏时可加5%胎牛血清于无血清培养基中，可修复受损细胞的状态，细胞复苏时接种密度要求大于1x105cells/mL可保证更好的复苏率。

2、杂交瘤细胞传代最佳的接种密度是多少？

      答：经过我们反复测试，最佳接种密度为1-2x105cells/mL,3-4天可达到峰值，细胞生长周期短，适合工业客户。

3、什么时候添加抗增剂？

      答：达到最大细胞浓度时，添加抗增剂，提高抗体产量

4、我的细胞一直是用含血清培养基培养的，可以直接转到无血清培养基中吗？

      答：细胞可以直接适应无血清培养基，无需驯化，四天可达到倍增峰值。

5、你们的杂交瘤细胞无血清培养基的质控标准有哪些？

      答： 质控标准如下

PH值：7.0-7.4

渗透压：270-350 mOsm/Kg

无菌：霉菌、细菌不得检出

内毒素：小于5EU/mL

装量：1000ml/瓶

外观:橘红色澄清液体

保存温度：2-8℃，避光保存

6、无血清培养杂交瘤细胞最大生长支持密度多少？怎么我养的几种杂交瘤细胞差距很大？

     答：由于杂交瘤细胞系种类繁多，不同的细胞系最大生长密度也不一致，目前我们测试的细胞株最高的密度可到3x106 cells/mL，最低的密度在1.6x106cells/mL。这取决于所培养的细胞株本身的特性。

7、贵公司无血清培养杂交瘤细胞抗体表达一般在什么水平？

     答：目前我公司测试的两株细胞系，IgG抗体最高表达量在480-520ug/mL，国外培养基IgG抗体最高表达水平在400-500ug/mL，我公司的产品在抗体表达量上有明显的优势。

8、我培养的杂交瘤细胞抗体表达量总是很低，有办法进一步提高抗体表达量吗？
     答：我公司在杂交瘤细胞培养方面，引入了全新的培养袋法，igG表达量可从 300-400ug/mL提高到480-520ug/mL，我们可提供相关技术支持。

使用说明

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背景知识

1.杂交瘤细胞的由来

杂交瘤细胞是一种应用非常广泛的工程细胞。用于单克隆抗体的生产。
美国科学家克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）在1975年证明将免疫的小鼠脾淋巴细胞（B细胞）与小鼠骨髓瘤细胞融合在一起，会得杂交瘤细胞，该细胞既具备B细胞能够产生抗体的特性，又具备肿瘤细胞能够无限传代（永生性）的特点。因此通过杂交瘤细胞
的不断传代，就会得到所需种类的单克隆抗体。这一发现开启了单克隆抗体应用于临床体外精确诊断及临床体内治疗的伟大领域。自此所出现的用于肿瘤治疗、免疫系统疾病治疗的基因重组抗体，皆由此发展而来。这两位科学家因此发现获得了1984年诺贝尔生理学及医学奖。

2.生产单克隆抗体细胞所需的培养基

生产应用所需的天然单克隆抗体，主要是通过动物细胞的大规模培养获得。

培养细胞使用的培养基主要有两种：
（1）血清培养基（1640培养基+10%-20%血清）。
这种形式为目前国内常见的应用方式。由于血清中蛋白含量很高（超过>20%以上），且蛋白种类很多（几十种），所以给后期的单克隆抗体纯化带来了更多的操作工艺环节与更高的纯化费用。由于血清为天然产品，品质控制受限，所以血清批间差大的问题众所周知，却无法排除。给生产企业带来了很大的困扰。

（2）应用杂交瘤细胞无血清培养基。
杂交瘤细胞无血清培养基，是专门为杂交瘤细胞生长所定制的化学成分明确、使用中不需添加血清的培养基。该培养基用白蛋白第五组分 (BSA)   、转铁蛋白等蛋白组分，替代了血清，达到了培养杂交瘤细胞的目的。由于培养基的化学成分明确，没有添加血清，因此，对单抗生产企业而言，简化了后期蛋白纯化的环节，降低了后期昂贵的蛋白纯化耗材的消耗。是目前国外生产单抗的主要方式。

友康生物的杂交瘤细胞无血清培养基产品，于2016年7月15日正式上市销售。友康生物的杂交瘤无血清培养基无血清、化学成分限定、低蛋白，已有的杂交瘤细胞可直接转入该培养基培养，无需细胞驯化操作。

杂交瘤无血清培养基，用于杂交瘤及小鼠骨髓瘤的培养。正如名字所展示的那样，这是一种无血清细胞培养基，在使用时不需添加血清。用于替代原有的1640培养基+血清的形式。
杂交瘤细胞是一种应用非常广泛的工程细胞。用于单克隆抗体的生产。美国科学家克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）在1975年证明将免疫的小鼠脾淋巴细胞（B细胞）与小鼠骨髓瘤细胞融合在一起，会得杂交瘤细胞，该细胞既具备B细胞能够产生抗体的特性，又具备肿瘤细胞能够无限传代（永生性）的特点。因此通过杂交瘤细胞的不断传代，就会得到所需种类的单克隆抗体。这一发现开启了单克隆抗体应用于临床体外精确诊断及临床体内治疗的伟大领域。自此所出现的用于肿瘤治疗、免疫系统疾病治疗的基因重组抗体，皆由此发展而来。所以，这两位科学家因此发现获得了1984年诺贝尔生理学及医学奖。
目前国内大规模应用杂交瘤培养基生产单克隆抗体，大部分用户是采用1640培养基+血清的形式，血清用量从10%-20%不等。由于血清中蛋白含量很高（超过20%以上），且蛋白种类很多（几十种），所以给后期的单克隆抗体纯化带来了更多的操作工艺环节以及更少的单克隆抗体的得率。另外，由于血清为天然产品，品质不可控，所以血清批间差大的问题众所周知，无法排除。给生产企业带来了很大的困扰。无血清培养基，由于培养基中没有血清，因此没有这些问题。但由于其高昂的价格，一直未能在生产领域得到广泛的应用。
友康生物是一家专注于无血清培养基领域的研发生产企业，为用户提供用得起的无血清培养基是友康生物的宗旨。友康生物迄今已经推出了免疫细胞无血清培养基（NK、T）、间充质干细胞无血清培养基（MSC）、MDCK细胞无血清培养基(可同时培养MDCK、HELA、MK2、Vero细胞)、无血清细胞冻存液、无动物源胰酶等产品。友康生物拥有国内为数不多的全自动液体培养基生产线，批次产能1000L，全机械手操作，内毒素水平0.03-0.06EU/ml。达到了国际无血清培养基的质量水准。已经上市的无血清培养基产品由于其比肩国外产品的性能与质量，迅速占据了中国的大片的市场份额。
无血清培养基是大势所趋。友康生物有信心在中国市场加速这一趋势转变为现实。