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卵巢癌miRNA PCR阵列-小鼠 (PCR Array)，货号：WC-MIRN0006-M
一、商品描述
产品内容
品 名： | Ovarian Cancer miRNA PCR Array plate |
种 属： | MOUSE |
货 号： | WC-MIRN0006-M |
规 格： | 96孔板 |
品 牌： | Wcgene® biotech |
产 品： | 96孔引物预置板，封板膜，说明书 |
储 存： | -20℃ |
有效期： | 六个月 |
生产日期： | 见外包装 |
使用限制： | 本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。 |
基因列表
| MOUSE | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| A | let-7a-5p | miR-105 | mir-130b | miR-141-3p | miR-15a-5p | miR-199a-3p | miR-204-5p | miR-222-3p | miR-29c-3p | miR-335-5p | miR-379-5p | miR-9-5p |
| B | let-7b-5p | miR-106b-3p | miR-133a-3p | miR-142-5p | miR-16-5p | miR-199a-5p | miR-205-5p | miR-223-3p | miR-302b-5p | miR-346-5p | miR-410-3p | miR-99a-5p |
| C | let-7c-5p | miR-106b-5p | miR-134-5p | miR-143-3p | miR-182-5p | miR-199b-3p | miR-206-3p | miR-22-3p | miR-302c-5p | miR-34a-3p | miR-429-3p | miR-221-3p |
| D | let-7d-5p | miR-10b-3p | mir-136 | miR-145-5p | mir-183 | miR-200a-3p | miR-211-5p | miR-224-5p | miR-30a-3p | miR-34a-5p | miR-448-3p | miR-29a-3p |
| E | let-7e | miR-10b-5p | miR-137-3p | miR-146a-5p | miR-184-3p | miR-200b-3p | miR-21-3p | miR-23a-3p | miR-30a-5p | miR-365-3p | miR-487b-3p | miR-325-5p |
| F | let-7i-5p | miR-125b-5p | miR-138-1-3p | miR-154-3p | miR-190-5p | miR-200c-3p | miR-214-3p | miR-26a-5p | miR-30e-5p | miR-375-3p | miR-488-3p | miR-377-3p |
| G | miR-100-5p | miR-126-3p | miR-140-3p | miR-154-5p | miR-192-5p | miR-203-3p | miR-21-5p | miR-27a-3p | miR-325-3p | miR-376a-3p | miR-495-3p | miR-93-5p |
| H | miR-101a-3p | mir-1284 | miR-140-5p | miR-155-5p | miR-195-5p | miR-203-5p | U6 | Snord68 | Snord49a | Snord72 | NTC | NTC |
二、检测原理
实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取 SYBR 荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入 SYBR 荧光染料，SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。
产品介绍
PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。
WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。
流程图
三、操作步骤
1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：
RNA： | 无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0 |
cDNA： | 严格按照所用试剂盒说明书操作 |
cDNA原液预实验内参范围： | ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右 |
*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA
2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。
3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。
表a. cDNA和mix混合液配方表
组成成分 | 96孔（搭配96孔板,每孔9 μl） |
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×） | 510 μl |
cDNA sample | 100 μl |
无RNA酶ddH2O | 290 μl |
ROX Reference Dye（50×） | 20 μl |
总体积 | 920 μl |
4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示
表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）
循环 | 温度 | 时间 | |
预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec |
变性 | 40 | 95℃ | 5 sec |
退火延伸 | 40 | 60℃ | 30 sec |
熔解曲线分析 | |||
5. 上机开始Real Time PCR反应
6. 结果导出，数据分析
四、适用仪器
芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）
Plate format | Instrument provider | qPCR instrument model |
A (96 well) | Roche Applied Science | LC480 |
Bio-rad | CFX96 | |
B (96 well) | Applied Biosystems | 7500， 7900HT， ViiA 7 |
C (96 well) | Applied Biosystems | 7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System |