细胞冻存和复苏常见问题！
马上放假了，我的细胞正培养着呢，怎么办？ 细胞生长旺盛，传代次数多了，目前用不了这么多，又不想舍弃，怎么办？ 那么这时候，我们需要把细胞冷冻起来，以便于长期保存，以备不时之需。而复苏，就是再次使用细胞时，使冷冻的细胞苏醒过来，恢复活力。 |
| 冻存细胞一般常用胎牛血清（FBS)和二甲基亚砜（DMSO）。血清是维持细胞生存环境；DMSO是冷冻保护剂，使细胞免受低温冰晶形成、及渗透压改变而导致的物理损伤； 细胞培养理论上基本建议的是两种：70%培养基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。 但经过有些实验室经过对比发现："10%的DMSO，90%的血清"复苏效果相对比"70%培养基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。 |
| DMSO产品咱就不多说了，什么品牌都有，只要是选择细胞培养级别的，效果应该差不多。不过我用的是MP Biomedicals二甲基亚砜（DMSO），效果还可以。 对于胎牛血清的选择就要相对谨慎了，市面上胎牛血清品牌可以说是鱼龙混杂，刚看过新闻的客户就会知道，高仿走私产品横行。慎重起见，给大家推荐CellMax品牌胎牛血清，目前有澳洲血清（库存紧张）和中国血源胎牛血清可供大家试用，购买。 |
| 细胞冻存和复苏需要注意哪些呢？ |
| 1、细胞本身的状态 一般情况下细胞的复苏还与原代细胞的活性有关，如果要冻存的细胞悬液本身活性不高的话，后面复苏的存活率也不高。 |
| 2、冻存细胞数量要足够 无论你再怎么小心，细胞在冷冻和复苏的时候都是最脆弱的，总会死掉一批。所以，一开始就要保证冻存细胞的数量足够。 |
3、慢冻快融 一般情况下，细胞冻存时要遵循“慢冻快融”的原则。标准的降温速度是1-2℃/min ，当温度到达-25℃，降温速度可加快至5-10℃/min，到-80℃可直接入液氮。有些实验室是梯度冻存：4度，-20，-80，液氮，依次冻存。而复苏速度越快越好。从液氮罐里取出来之后，迅速放在37°C水浴中，尽快融化 |
| 4、注意安全 细胞冻存和复苏是细胞培养技术里面最容易出事的部分。凡是和液氮接触的操作，注意戴保护眼镜和手套。注意：复苏的时候，在水浴中摇摇动的时候会有爆炸的可能性。另外， DMSO是有毒致癌的。接触的时候一务必要带好手套。 |
| 5、做好标记 对于冻存细胞，一定要做好标记。如：细胞名称、代数和冻存日期。特别是公共实验室，更要做好标记，避免找不到自己的细胞。 |
| 6、DMSO是否去除 由于DMSO是一种有毒致癌物质。那么，解冻之后，应不应该去除冻存液中的DMSO呢？答案是no。除了极少数特别注明的对DMSO敏感的细胞外，99%的细胞都不需要去除DMSO。后面细胞培养中频繁换液会慢慢去除掉DMSO。 |