蛋白过表达试剂盒

Protein Overexpression Kit

成本降5倍，蛋白表达超Lipo2000!

无需Opti-MEM，无需换液

送表达胞内蛋白GFP、跨膜蛋白KCNQ4、胞外蛋白MBP的质粒还送Flag直标抗体!

雅酶蛋白过表达试剂盒（ZC101）基于一种高效的转染试剂，配合使用表达增强剂，可将携带目的基因 的质粒转染至真核细胞内并高效表达。本试剂盒可在极少量细胞中完成蛋白过表达情况的检测，帮助操作 者迅速判定所构建的基因在细胞系中的表达情况。

根据表达蛋白在细胞内的分布类型，本试剂盒提供了三种可作为转染阳性参照的质粒（均以 pcDNA3.1 为载体，Amp 抗性），可分别在哺乳动物细胞系中过表达胞内蛋白 GFP（32 kDa），分泌蛋白 MBP（45 kDa）和跨膜蛋白 KCNQ4（82 kDa）。三种质粒均为无内毒素质粒，浓度均为 200 ng/μL，可直 接用于细胞转染，也可作为模板进行目的基因的构建。三种质粒的蛋白基因上均含有 His/Strep/Flag/HA 四种常见的标签蛋白基因，便于操作者采用与之适配的标签抗体进行 Western Blot 检测。

此外，本试剂盒额外提供 HRP 偶联的 DYKDDDDK-tag 抗体（直标抗体），无需使用二抗，经 1:10,000 稀释后可直接用于阳性参照蛋白和含有 Flag-tag 目的蛋白的 Western Blot 检测。

转染效率高

可在含血清与抗生素的完全培养基中转染，在有无血清的条件下均可发挥作用

细胞毒性低

独特的组合配方最大程度减少对细胞的损伤，保持细胞活性适用范围广

用于大多数常见的哺乳动物细胞系的 DNA 转染，如悬浮细胞(CHO-S、Expi293F、HEK293F、HEK293S 等),贴壁细胞(HEK293T、Hela、NIH/3T3、MCF-7、CHO-K1、Hep G2、COS-1、COS-7 等)

适配性强

无需使用特定培养基稀释转染试剂，使用培养细胞所用的同种培养基(不加血清) 即可

操作便捷

操作方法与传统转染方法一致，且细胞转染后无需换液，只需添加表达增强剂即可

注:红色组分为赠品。

实验结果分享

分别使用ZC101和Lipo2000在相同细胞数的Expi293F和CHO-S细胞系中转染相同质量的GFP表达质粒。转染后36h，使用流式细胞仪检测细胞的GFP蛋白表达阳性率。

结果表明：如图1所示，对于两种不同的悬浮细胞系，使用ZC101过表达GFP的细胞阳性率显著高于Lipo2000。

图1，悬浮细胞系中GFP蛋白表达的流式细胞术检测结果

接下来，使用ZC101和Lipo2000在相同细胞数的不同种类贴壁细胞中过表达GFP蛋白，36h后使用荧光显微镜观察蛋白表达情况。

结果表明：如图2所示，在Hela和HEK293T细胞系中，ZC101和Lipo2000的效果旗鼓相当；而在COS-7、MCF-7、NIH/3T3和HepG2细胞系中，使用ZC101的GFP表达效果显著优于Lipo2000。

图2，贴壁细胞系中GFP蛋白表达的荧光显微镜观察结果

最后，在不同的细胞系中使用ZC101和Lipo2000过表达胞内蛋白GFP，跨膜蛋白KCNQ4，以及分泌蛋白蛋白MBP。36h后，取相同体积的细胞裂解液或细胞上清通过标签抗体进行WB检测。

结果表明：如图3所示，在Hela和HEK293T细胞系中，蛋白表达量相差不大；而在Expi293F、CHO-S、NIH/3T3、Hep G2、COS-7和MCF-7细胞系中，与Lipo2000相比，使用ZC101过表达蛋白量更高；综合比较，使用ZC101的平均蛋白表量高于Lipo2000。

图3，不同细胞系过表达蛋白后的WB检测结果

使用注意

以NIH/3T3细胞为例，转染细胞加入不同浓度的表达增强剂24h后，细胞状态会有所不同。如图4所示，随着表达增强剂浓度的不断降低，圆形非贴壁的悬浮细胞数量逐步减少。因此，若转染的细胞对表达增强剂较为敏感，建议将其使用终浓度由6%降为3%。