诺扬生物

雅酶：高纯度线粒体及蛋白提取Kit，让线粒体提取更高效!

诺扬生物

2025-03-03

市售大部分线粒体提取试剂盒采用一步密度梯度法，得到的多为粗线粒体；而PC205采用两步密度梯度法，所获得的纯线粒体成分更均一，纯度更高。

图1 小鼠肝脏各组分流式分析结果

取100mg小鼠肝脏组织按照说明书操作，获得小鼠肝脏匀浆液、沉淀（含有核、未破碎细胞等）、上清（细胞质相关物质）、粗线粒体、纯线粒体样品。用PBS将各组分稀释100倍后进行流式检测，结果如图1所示：在纯线粒体组分中，具有一类均匀分布的单独集群，表明该组分中具有很高的纯度。

图2 小鼠肝脏线粒体健那绿染色

取100mg小鼠肝脏组织，使用PC205提取线粒体，经健那绿染液染色后，在显微镜下镜检。如图2所示，视野中可观察到蓝绿色线粒体呈现出小棒状或哑铃状，由于肝组织中线粒体含量丰富，线粒体大多呈现聚集状态。

图3 小鼠肝脏线粒体MitoTracker染色结果

将MitoTracker Red（一种膜电位依赖性线粒体染料）对提取的纯线粒体进行处理，并置于荧光显微镜下观察，结果如图3所示：提取的线粒体悬液经染色后发出红色荧光，说明经PC205提取的线粒体膜电位保存良好，具有很高的活性，适用于进一步的功能研究。

PC205提取的线粒体可用于线粒体功能研究、线粒体蛋白分析和mtDNA的提取，以下是蛋白分析应用：

图4 线粒体蛋白WB检测

Mt为：使用PC205提取的小鼠肝脏和HEK293细胞线粒体蛋白

Total为：RIRA裂解液提取的肝脏组织和HEK293细胞总蛋白

经BCA法蛋白定量后进行WB检测（上样量：10μg/孔）。

如图4显示，线粒体组分中COX IV和Hsp 60的条带明显强于总蛋白组中的各自条带，说明使用PC205可以很好地富集线粒体蛋白；此外，线粒体组分中没有Lamin A/C和Syntaxin 16的条带，表明提取的线粒体中没有细胞核和高尔基体等其它细胞器的污染。

实验所用雅酶精品抗体名称与货号

那么，在使用PC205提取线粒体的过程中，

有哪些注意事项呢？

一定要使用新鲜的组织样品，千万别用经冷冻保存过的组织。

实验全程低温操作。

离心机要求：

① 可4℃控温；

② 最高转速可达21,000×g；

③ 升速快：能在最短的时间内(15sec内)速度升至21,000×g。

细胞破碎程度是提取线粒体的关键，若细胞破碎不足会影响线粒体的得率，细胞破碎过度则会影响线粒体结构的完整性。建议提前做预实验探索细胞破碎条件，推荐方案如下：

组织样品采用普通玻璃匀浆器即可满足需求。

细胞样品：

①可选择间隙严密的研杵方能达到破碎效果。匀浆5次后，取匀浆悬液与台盼蓝染液混合，根据破碎情况适当增加匀浆次数；

②可选择超声破碎仪破碎。用最低功率，探索破碎条件，如按照开1sec，关2sec的频率，超声3~5次；

③细胞破碎程度鉴定：要使细胞破碎比例达50%~60%（注意：是破碎比例，并非细胞活率达50%~60%哦，以2×10⁷个细胞为例，破碎后的活细胞数应在8×10⁶至1×10⁷个），可取2~5μL破碎的细胞，使用PBS稀释1倍后测量细胞活率，再计算活细胞数量值。

货号	名称	规格	价格
PC205	高纯度线粒体及线粒体蛋白提取试剂盒	30次	498元

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