膜蛋白通常都具有一定的疏水性和嵌入性，在水溶液中不易稳定存在，特别是跨膜蛋白，其具有多次跨膜结构域，难以提取分离，最终导致WB失败。

提取膜蛋白时需要使用去污剂。去污剂也称为表面活性剂，是一类同时具有亲水头部和疏水尾部的分子，能够使脂膜解体释放膜蛋白，并维持去膜状态下膜蛋白结构和功能的稳定性。

膜蛋白通常表达量比较低，在总蛋白中占比不高，用提取的总蛋白检测时，目标蛋白的含量可能低于WB检测下限，难以检测到。

提取内源性的膜蛋白，可以尽可能地增加样本量。对于外源性目标膜蛋白，可通过基因过表达的方法来提高目标蛋白量。

温度、pH值、膜组成等因素很容易影响膜蛋白结构的稳定性。膜蛋白在热变性过程中容易发生聚集和沉淀，使条带分子量发生变化或扭曲。

提取膜蛋白通常要在4℃，缓冲液pH7.4-8.0的条件下进行。

普通蛋白样品做WB检测通常会进行100℃热变性处理，但膜蛋白具有疏水性，高温加热后易发生聚集并形成二聚体或多聚体，甚至形成沉淀滞留在胶孔中，不能被抗体很好地识别。因此，膜蛋白样品进行WB时通常有以下几种处理方式：

(1)

不加热直接上样；

(2)

50℃加热样品10min；

(3)

37℃处理样品30min。

受到化学性、物理性和生物性因素等的影响，膜蛋白容易降解，同时也不容易在常温保存。

确保提取膜蛋白的溶液中已加入蛋白酶抑制剂，膜蛋白样品短期保存可置于4℃，长期保存应分装置于-80℃，避免反复冻融。

部分膜蛋白分子量较大，大分子量蛋白进行WB操作时，电泳，转膜等条件需要摸索，较为困难。

有些膜蛋白相对分子质量较大，大分子蛋白进行WB时需注意：

(1)

分离胶浓度最好选择6%-8%，并小心剥胶；

(2)

转膜时间需要相应延长；

(3)

转膜液中甲醇含量可适当降低，推荐使用湿法转膜，效率更高。

这款产品绝对能让蛋白提取工作事半功倍，它的优点可以总结为下面几条：

将4种膜蛋白（单体分子量分别为70kDa、80kDa、100kDa和40kDa）过表达于HEK293细胞，分别取等量的细胞（5×10⁶个）使用3种不同品牌试剂盒进行膜蛋白提取，使用Anti-Strep tag II抗体进行WB检测。

进口T品牌与雅酶PC202的WB对比结果如图1所示，国产B品牌与雅酶的对比结果如图2所示。

结果表明：雅酶PC202的检测结果优于进口T品牌与国产B品牌。

分别取5×10⁶个不同种类的细胞，使用T品牌和雅酶PC202所提取的膜蛋白BCA定量结果如图3所示。

结果表明：对于不同种类细胞，雅酶PC202提取的膜蛋白量均高于T品牌。

使用T品牌和雅酶PC202对HEK293细胞进行膜蛋白提取，分离出胞膜蛋白（Membrane proteins）和胞浆蛋白（Cytosolic proteins）组分。用Anti-HSP 90抗体进行WB检测，结果如图4所示。

结果表明：两种试剂盒膜质分离效果均表现良好，在胞膜蛋白组分中仅可检测到极少量胞浆蛋白。

取20mg小鼠心脏组织，用雅酶PC202提取得到胞膜蛋白/胞浆蛋白，使用不同靶标的抗体进行WB检测，检测结果如图5所示。

结果表明：雅酶PC202可以出色地完成从组织样本中提取膜蛋白的工作。