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RayBio-芯片常见疑问

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2023-10-26

一半定量和定量芯片的差异

1 检测原理和载体的不同：

A 半定量芯片目前有夹心法和标记法半定量芯片，且载体有膜的和玻片的。

B 定量芯片目前只是采用夹心法，且载体只有玻片

2 抗体阵列的数量：

定量芯片底部没有barcode(即白色的条码),且16个孔每个孔都点有抗体阵列,而半定量芯片一般都是上半部分4或8个孔点有抗体,或者16个孔都点有抗体阵列。

3 抗体重复点：

定量芯片每个抗体点都是4个重复点，半定量芯片是2个或4个重复点。

4 检测性能的差异：

半定量夹心法芯片和定量芯片检测原理都相同，唯一的不同是定量芯片试剂盒中包含一个混合的标准品（多种标准品混合在一起），如同ELISA一样将标准品梯度稀释以后，在定量芯片上用8个孔检测梯度标准品，其余8孔检测样品，试验操作完成后将标准品系列中对应的每个因子的标准曲线画出来，与样品中每种因子的信号值进行比对，完成定量。定量芯片就是多重的ELISA,可以替代传统单一的ELISA。半定量夹心法芯片与定量芯片试验操作完成后得到的图像和从图像中提取的信号值都是相似的，但是半定量芯片没有标准曲线，没有办法与标准曲线去比对得到样品中因子的确切含量，但是可以半定量芯片的信号值比对样品之间因子含量是否有差异，筛选出组间的差异表达因子,进一步选择合适的精确定量分析来验证。

二 ProteinArray的原理

蛋白芯片与其他抗体芯片系列不同的是蛋白芯片是将蛋白多肽点在载体上的，而不是抗体。蛋白芯片主要是用于检测蛋白-蛋白之间相互作用，蛋白-小分子相互作用，抗体特异性和自身抗体的检测。

1 蛋白-蛋白相互作用

将蛋白点在载体上，有三种方式实现蛋白-蛋白相互作用的检测：

载体上的蛋白和样品中的目标蛋白结合，然后加入目标蛋白的抗体孵育,然后再加入标记的抗种属二抗（例如抗小鼠、抗大鼠、抗兔子、抗人），最后通过化学发光或者荧光实现信号检测。
载体上的蛋白和样品中的融合蛋白结合，融合蛋白结合有tag, 通过抗tag的抗体实现信号检测。
载体上的蛋白和样品中生物素标记的蛋白结合，直接通过HRP/Fluor-链霉亲和素实现信号检测。

2 小分子-蛋白相互作用

载体上的蛋白和样品中的目标小分子结合，然后加入标记的抗小分子的抗体，最后通过化学发光或者荧光实现信号检测。
载体上的蛋白和样品中的与蛋白偶联的小分子结合,通过抗蛋白的抗体实现信号检测。
载体上的蛋白和样品中标记的小分子结合,直接实现信号检测。

3 抗体特异性和自身抗体的检测

载体上的蛋白和样品中的自身抗体结合，然后加入标记二抗(抗抗体)，最后通过化学发光或者荧光实现信号检测。
载体上的蛋白和样品中标记的抗体结合，直接实现信号检测。

三芯片定制的流程是什么，定制芯片的价格如何

如果需要定制芯片，我们需要先了解的信息是:

样品种属、样品类型、样品数量；
感兴趣的因子列表；
需要定制的芯片是定量芯片、夹心法的半定量芯片、还是标记法半定量芯片；如果想要定制定量芯片或夹心法半定量芯片，一般就是只能选择现有的定制列表中的因子，且需要咨询技术支持来核对这些因子是否没有交叉反应，能否放在一张芯片上。如果非常想要加上1、2个不在列表中的因子，这时候首先需要和科学家确定是否能够加上。如果想要定制标记法半定量芯片，是可以添加不在RayBio定制的列表中的因子，通过另外购买抗体进行定制。

四动态范围是什么意思

动态范围简单的理解就是能检测到的最大信号和最小信号的范围。动态范围越大，所能检测的信号层次就越多。

玻片芯片的动态范围比较大，可达到10⁴-10⁵ , 也就是说玻片芯片可能检测到的差异信号会相对多，且信号值的差异会在数值上体现的较大；

膜的动态范围相对较小，可以达到 10³ , 膜芯片上检测到的信号值差异在数值上体现的较小。

五定量芯片试剂盒中玻片的数量、规格，可以检测几个样品

一般定量芯片试剂盒的规格有1张、2张、4张玻片的规格。

1张玻片上可以做8个孔的标准曲线，其余8孔可以检测样品；对于2张玻片，可以每张玻片都做标准曲线，这样2张玻片就可以检测16个样品；或者2张玻片同时操作，保持所有条件一致，可以在第一张玻片上只做一个标准曲线，第二张玻片上做一个空白control和一个阳性质控(可选用standard 3)，用于玻片间的归一化。其余孔可以用于检测样品。