诺扬生物

Raybio-蛋白质芯片的原理是什么

诺扬生物

2023-10-26

蛋白质芯片的检测原理主要是基于抗原抗体特异性非共价结合。蛋白质芯片目前采用的检测方法主要有双抗体夹心法检测和样品标记法检测。

双抗体夹心法

夹心法抗体芯片是将捕获抗体预先固定在固相载体上，生物样品加入到芯片上一起孵育反应后，其特异性的抗原与捕获抗体结合，然后加入生物素标记的检测抗体一起孵育，最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。基于“三明治”双抗体夹心法建立的芯片，高品质的抗体对是此方法的关键，夹心法有很高的灵敏度，检测浓度可以低至1-10 pg/mL，每增加检测一个蛋白，芯片上就需要增加一个抗体对，这样可能出现交叉反应，因此需要将每个抗体对与芯片上其他抗体对进行检测，验证是否可以引入这个抗体对，且不对其他抗体对的检测造成干扰，通过优化筛选将交叉反应降到最小。

由于抗体对之间可能存在的相互影响，夹心法抗体芯片一次性检测蛋白的数量有所限制，但是可以用于蛋白的定量检测。目前，RayBiotech验证配对的抗体对有大于1000种抗体对，基于双抗体夹心法开发的半定量芯片有200多种，定量抗体芯片有100多种，涵盖的因子1000多个，包括炎症因子、凋亡因子、生长因子、肥胖因子、血管因子、信号转导磷酸化、白介素等等各个疾病相关的因子。夹心法芯片具有特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好的优点。

样品标记法

标记法芯片只需要一个捕获抗体，它用生物素标记样品来代替标记检测抗体。将捕获抗体预先固定在固相载体上，生物样品在检测前先进行蛋白生物素标记，将活化的生物素与蛋白的氨基共价偶联，生物素标记后的样品加入到芯片上一起孵育反应，捕获抗体结合特异性的蛋白，然后加入HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。这种模式可以检测那些没有合适的抗体对来建立双抗体夹心法检测的分析物。因为溶液中没有自由的检测抗体与其他抗体相互作用产生干扰，那么基于抗体相互作用产生的交叉反应就可以避免，所以引入新的抗体到标记芯片上比较容易，一个芯片上可以有几百个甚至几千个抗体。目前RayBiotech开发的标记法芯片可以一次性筛选2000个因子，可定制5000种以上因子的标记法芯片。标记法芯片非常适合于大批量的筛选试验。