无缝克隆试剂盒——DNA Assembly Mix Ultra

经典的使用酶切连接进行克隆载体构建的方法，由于只能选择载体上特定的酶切位点，因此进行多个插入片段构建时往往需要进行多次酶切和连接，不仅操作繁琐，而目也会引入多余的碱基，是一种比较低效的载体构建方式。基于重组原理的无缝克隆技术，依靠插入片段与线性化载体末端 15~25 nt 同源序列的重组，省却相对复杂的酶切连接步骤，理论上可以将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，具有重组效率高，载体自连背景极低等优点，是一种简单、快速、高效的 DNA 定向克隆技术。

无缝克隆VS 普通酶切-连接

· 简单便捷PCR 产物体系与载体酶切体系，省去繁琐的纯化步骤

• 快速反应反应时间短，最快仅需 5 min 即可完成反应

• 性能稳定对高温、氧化、反复冻融、干冰利条件均有更强耐受性/ 二氧化碳等不

· 高阳性率定向克隆单个DNA片段至载体上，阳性率高于95%

· 单片段、多片段均可连接单个或多个片段同时插入，省去重复纯化与酶切过程，提供最大的灵活性

高转化子数与低克隆突变率

在保持上一版本优异的单片段克隆性能前提下，升级版对于多片段克隆获得的转化子数量和突变率有更显著的优势。

性能稳定，无惧极端逆境

百时美升级版无缝克隆试剂盒，相比于上一版本进一步提升了稳定性。在高温、氧化、反复冻融或干冰 /二氧化碳暴露等不利条件下，依然可以获得足够数量的阳性转化子。

产品列表

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连接酶——T4 DNA Ligase (Fast)

T4 DNA连接酶的原理

① 催化相邻DNA链的5’-末端磷酸和3’-末端OH之间形成磷酸二酯键

② 需ATP作辅酶

③ 既可以催化粘性末端连接，也可以催化平末端连接

产品特性

超高纯度，保证底物稳定

活性高，反应快，室温下10分钟即可完成粘性末端连接

连接效率高：愚公&百时美T4 DNA Ligase (Fast) 在限制酶CutOneTMBuffer（添加1 mM ATP）中具有100%活性，酶切产物可无需纯化直接连接

HL-Uracil DNA Glycosylase (UNG, UDG)

本品为冷水鱼中鉴定的 热敏感尿 DNA 糖苔酶(已申请发明专利)，能有效水解 DNA 链中的尿呢糖替键，50℃下5分钟即可完全失活，不影响扩增反应。DNA扩增体系中加入 dUTP 和 HL-UDG，扩增前 25 孵育 5-10 min，可以有效控制残留扩增产物交叉污染。