CRISPR/Cas9 是一种基于细菌天然免疫机制开发出来的基因编辑技术,用于抵御病毒等外来物入侵的一种防御机制。经改造的CRISPR系统主要由Cas9蛋白和单链向导RNA(sgRNA)组成,其中sgRNA对靶序列进行特异性识别,Cas9蛋白负责对识别的靶序列进行切割,从而实现DNA的双链断裂。
DNA双链断裂后,细胞对DNA的损伤修复机制就会被激活。目前主要有两种修复机制,非同源末端连接(NHEJ)修复和同源重组介导的修复(HDR)。没有外源模板时,机体主要进行NHEJ修复。NHEJ修复过程中,会在切割位点随机的进行缺失或插入碱基序列,导致DNA移码突变,从而使基因不能正常表达。存在外源模板的情况下,机体会启动HDR修复来实现基因的精准插入或者替换。
KO 细胞系的应用
目前,基因敲除验证(KO)是最受信任且接受度最为广泛的抗体特异性验证方法之一。利用CRISPR-Cas9技术,构建目的基因缺失的KO细胞系。如果抗体是特异性的,那么不应该检测到信号,而在野生型(WT)细胞系中则应该检测到特异性靶蛋白的信号。KO细胞系提供了真正意义上的阴性对照,一度被称为“抗体特异性验证的金标准”,以确认抗体对目标蛋白的特异性。
隆重推出 KO 系列产品
同时提供KO细胞系以及对应的KO裂解液
Bioss提供热门指标的KO细胞系以及对应KO裂解液,验证进程仍在继续:
KO验证的特异性抗体
CRISPR/Cas9基因敲除技术服务
一
服务内容与流程
服务内容:
服务流程:
1.客户提供需要敲除的指标信息,与公司商定具体的制备项目、数量和费用,双方签订《委托CRISPR/Cas9基因敲除服务合同》。
2.双方确定合作细节,实验过程中及时反馈实验进程,并按照规定时间完成委托服务。并向客户提供委托产品与实验报告。
二
技术流程
1.RNP转染法
2.质粒转染法
三
案例结果展示
四
服务优势
2.每个靶标设计多条sgRNA,提供多种敲除策略,最大限度的提高的KO效率,提高蛋白水平的敲除概率。
3.通过Sanger测序后,多种软件分析编辑效率,提高编辑结果的准确性。
4.不同的细胞系具有专属的转染方案,提高靶标编辑的效率。