产品介绍：

货号∶RD3XXXx     规格∶20次

第二代HyCyteT基因干扰稳转试剂盒（shRNAx2.0）是基于海星生物的位点特异性SSR重组酶技术开发的基因干扰稳转试剂盒。

产品特点∶

利用SSR （Site-specific Recombinase）重组酶实现干扰序列载体高效稳转，大幅提升了干扰效率。试剂盒的转染操作与siRNA转染操作一样，构建与病毒一样的基因干扰稳转细胞株，是新一代的基因干扰技术产品。

干扰试剂盒包括了人（Human）和小鼠（Mouse）基因组的所有基因，shRNAx2.0试剂盒包含2个优选的shRNA干扰序列载体、1个表达GFP/对照shRNA干扰序列载体和1管位点特异性SSR重组酶，通过SSR重组酶高效催化shRNA载体整合到细胞的基因组中，实现shRNA片段的细胞稳转效果;同时由于SSR重组酶整合效率极高，shRNA片段在目的细胞基因组大约含有10~100个拷贝，高拷贝数大幅提升了shRNA片段的表达效果，从而提升了基因的干扰效果。shRNAx2.0载体包含有puro抗性基因和GFP荧光基因，可以轻松通过荧光判断干扰载体的转染效率和目的载体表达效率，并通过Puromycin药物筛选，获得高表达的细胞株，轻松建立基因干扰稳转细胞株。shRNAx2.0干扰稳转试剂盒的操作与siRNA转染过程一样简单，对各种细胞都有非常好的干扰效果，也适用于间充质干细胞（MSCs）等的基因功能研究。

原理介绍：

HyCyte"基因干扰稳转试剂盒（shRNAx2.0）的干扰效率与传统病毒法干扰效率相当。因其独有SSR重组酶可以构建高拷贝"稳转"细胞株，同时可以通过药物筛选到高效、稳定的干扰稳转细胞株。shRNAx2.0试剂盒是除了病毒法之外唯一可以轻松获得稳定干

扰的稳转细胞株的实验方案。

使用HyCyte"基因干扰稳转试剂盒（shRNAx2.0）构建干扰稳转株的周期仅1~2周，便可以拿到长期稳定干扰的细胞株，是大幅提升实验速度的方案。

技术原理：

载体结构：

应用流程：

HyCyte"基因干扰稳转试剂盒 （shRNAx2.0）操作步骤（脂质体转染法）∶

本试剂盒可以采用的转染试剂是Lipofectamine°2000 Reagent （cat#11668-030），具体参照转染试剂每种细胞情况。不同类型的转染试剂，请按照制造商的操作说明进行转染。

注意∶悬浮细胞不推荐使用脂质体转染法。

HyCyte"基因干扰稳转试剂盒（（shRNAx2.0）操作步骤（电转化法）∶

本试剂盒可以Neon转染系统，具体参照设备对每种细胞参数。不同类型的电转设备，请按照制造商的操作说明进行优化。

注意∶悬浮细胞推荐使用电转化法。

HyCyte"基因干扰稳转试剂盒（shRNAx2.0）配有GFP对照shRNA载体，可以按照实际使用的方法和细胞情况，进行实验摸索，建议48小时后的目的细胞的GFP的阳性率不低于50%，shRNAx2.0试剂盒才能获得最佳效果。

产品应用：

Q-PCR操作流程：

细胞操作流程：

成功案例分析：

其他参考资料：