用了雅酶膨胀胶 人手一台共聚焦

膨胀显微试剂盒ZX101

攻略：如何用宽场荧光显微镜拍摄膨胀样本，得到高清的亚细胞图像

1.   一台较好的倒置荧光显微镜是前提。确保该显微镜的激发光强度还行，不至于拍啥样品都比较弱。如何判断荧光行不行?最简单的，常用的DAPI染色的样品，在最大荧光强度下，用肉眼观察目镜，应该感觉比较刺眼。正置的显微镜理论上可行，但实际操作中不方便。

QA合集

Q: 膨胀胶最后怎么用显微镜观察?

在宽场显微镜下观察切取适合载玻片大小的膨胀胶块，confocal切取玻底皿大小胶块观察。胶块大小没有硬性要求，只要保证观察时胶块与底部平面贴合就行。

Q:   同一个样品可以正常拍完共聚焦再进行使用膨胀胶操作吗?

可以，只要荧光没有大幅度衰减，样本就可取出进行膨胀。

Q: 看 PPT 演示是不是膨胀后背景颜色更高啊?

PPT 中膨胀后背景颜色比膨胀前背景稍高是因为膨胀后样本荧光强度变弱导致拍摄时需要 调高曝光时间，可以通过提高一抗二抗浓度解决背景问题。

Q: 胶膨胀以后和没有膨胀前，标尺应该怎么标?

按照显微镜镜头倍数正常标尺标大小标就可以。

Q: 加完膨胀胶细胞还能继续培养吗?

不能

Q: 如果要可视化细胞器，比如线粒体，它会受到影响吗?

细胞器不受影响，能否观察到取决于细胞器染色Maker 是抗体还是化学物质，抗体膨胀后不受影响，如果是化学物质就需要判断是否共价连接，非共价连接在膨胀过程中可能会丢失信号 。

Q: 最后要把胶放在载玻片上吗?

宽场显微镜用载玻片，Cnofocal 以上用玻底皿观察。

Q: 膨胀胶只能拍活细胞是吗?

不适用活细胞。

Q: 膨胀胶是不是只能针对爬片进行操作?

目前 zx101 只适用细胞爬片。

Q: 膨胀胶可以针对细菌使用吗?

不建议，因为细菌有细胞壁，去除消化细胞壁后可以膨胀。

Q: 请问膨胀后玻片会跟胶分离吗?

在膨胀过程中会自动分离。

Q: 样本是从爬片转移到了胶中吗?

是的，因为膨胀胶将生物样本包裹在里面。

Q: 和共聚焦相比，优势是什么?

ZX101 的优势在于在普通宽场显微镜条件下可以获得Confocal清晰度水平的图片，在实验 室中轻松获取高分辨率图像，节约大型仪器预约时间。如果在共聚焦仪器拍摄，使用膨胀胶 可以得到比confocal清晰度更高的，更立体的图像。

Q: 膨胀胶可以做外泌体吗?

理论上可以，保证荧光强度够强，膨胀后就可观察到。

Q: 膨胀后的胶体，能保存多久?如果不能及时拍摄，怎么保存久一点?

如果膨胀样本是免疫荧光可以在4℃ 避光水溶液中保存3 -5天。建议尽早拍摄，防止荧光衰减淬灭。

Q: 线粒体用什么染?

雅酶的一抗HSP60 ( 货 号P900009)1:50   使用，二抗为Thermo-488。

Q: 膨胀胶可以膨胀更高倍数吗?

ZX101目前可以膨胀4 倍左右，更高倍数的膨胀胶还在研发测试阶段。

Q:膨胀胶的应用有哪些？

共定位分析，解析细胞精细结构，超高分辨成像

Q:膨胀胶适用于植物细胞吗？

植物细胞的话要把细胞壁去掉，因为细胞壁比较硬。如果是植物的原生质体的话，理论上是可以的。

Q:膨胀胶对病理组织可不可以用？

理论上是可以的，但试剂盒目前不推荐用户做组织，因为组织比较硬，有间质之类的物质，是需要在前期膨胀之前进行一个额外的处理才能用于膨胀。

Q:荧光显微镜有要求吗？倒置还是正？

需要倒置的，荧光也不能太弱，比如20年前的荧光显微镜，就有可能一点都看不见。首先要保证倒置显微镜的激光强度，镜头效果等整体还比较好才行。

Q:为什么用我们这个试剂盒之后，我们可以看到膨胀前和膨胀后它的荧光会变弱?

当均匀膨胀之后，分子之间的空间距离就会被拉大。在原本的视野里面，一个视野可以拍到4个荧光分子。当膨胀完之后，一个视野只能拍到一个荧光分子，所以信号会变弱。这个没有关系，只要保证膨胀之前的样本有足够的量，后面拍照相应地拉长曝光时间，是能够解决这一点缺点的。

Q:膨胀样本的免荧光抗体，如果用我们的这个膨胀试剂盒需要提高几倍浓度使用？

4-8倍

Q：悬浮细胞怎么处理？

悬浮细胞可以通过一个离心的方式或者甩片的方式，将细胞滴到吸附到盖玻片上。

Q:不使用细胞爬片可以吗？直接在细胞培养皿可以吗？

不推荐，因为细胞培养皿一般是用塑料做的。胶在塑料上的凝固效果不如在玻璃上凝固效果好。它会导致胶和细胞之间接触的位置凝固得不好，这个时候样本不能正常地粘到胶上，会导致实验的失败。

Q：胶泡水里面烂了怎么办？

这个很大原因是胶一开始就没有凝好。灌胶的时候，可能接触空气形成一个很大的气泡，这时候胶其实就没有凝好,强行放到水里面膨胀，就会导致胶烂了。所以一定要确认胶凝固好了之后再去放水里面膨胀（是有韧性的，摸得出来），如果发现胶还跟水一样，这个时候就不要去放到水里面膨胀。先找上一步的原因。

Q：胶不凝怎么办？

第一最大可能性就是跟空气有接触，这时候基本上就粘不了，有空气会产生大的气泡。第二也有可能是试剂盒保存不当，导致某些东西降解。最大原因还是拍照的过程中空气的进入，一定要切记避开空气进去。

Q：凝胶装置漏胶怎么办？

目前的这种配胶方式会有缝隙，正常大概会损失1%，不到5%，所以一点点漏胶是正常的。如果大面积漏胶，说明装置没有放的特别的紧密。再检查一下装置是否正确的放好。绿色拨片和载拨片是不是贴合紧密，千万不要有一个大的空隙。

Q：膨胀完效果差甚至看不见怎么办？

很大的可能性是原始的样本染色强度比较弱。所以在膨胀前一定要检查样本是否染色成功。大概的定位是能够看得出来的，荧光要足够强。判断的一个原则，就是染完色之后用普通荧光显微镜去看未膨胀的样本，镜下足够的亮，这样的样本是很适合去膨胀的。

Q：膨胀胶是否可以做mitotracker?

测试过细胞如果用mitotracker去染色，然后再去膨胀是没有问题的。

Q：膨胀完样本可以等多久再拍照？

建议是尽快拍照。比如今天做完这个膨胀实验，然后第二天就拍照。因为样本放太久多少都会有一些降解，或者是有一些微生物污染。

Q:自己放冰箱可以保存多久呢？

测试过放个三四天没有问题是可以的。一定要避光。

Q：抗体的用量变大了，那会不会比较浪费钱呢？

介绍一个小的技巧，配一个20ul的体系，用20ul体系去染色。把抗体加到20ul体系里面，然后把卡片反扣到液体上，这个时候染色，最后倒扣上，体积是20ul。就算你1比20用，也用了1ul抗体，就不会增加你总的抗体用量。

雅酶膨胀胶产品专题：

用了雅酶膨胀胶 人手一台共聚焦：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1874&id=1874‍

膨胀显微试剂盒操作指南：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1917&id=1917