MBL：技术丨TCR四聚体：分析TCR-MHC相互作用的理想试剂
在免疫学和细胞生物学领域中，了解T细胞受体(T cell receptor,TCR)的结构和功能对于解开免疫系统的复杂性至关重要。TCR在识别抗原呈递细胞表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递的抗原方面起着关键作用。T细胞识别靶细胞主要是通过TCR识别特异性MHC/肽复合物(pMHC)来实现的。详细的生化研究已证实，TCR/MHC-肽复合物相互作用通常较弱(KD≈0.1–90μM)。目前的证据表明，MHC/肽复合物与TCR的快速解离率和连续结合可能对T细胞活化至关重要。MHC I类分子的四聚化是定量抗原特异性T细胞的一个重要里程碑，因为多聚化可产生更高的结合亲和力，四聚化的MHC I类和II类复合物已广泛用于定量和表征抗原特异性T细胞以及探究TCR-MHC相互作用等研究。使用可溶性TCR四聚体识别特定的MHC/肽复合物，有助于从另一角度研究T细胞和抗原呈递细胞之间的相互作用。
基于强大的开发平台，MBL的科学家将四聚化技术从MHC分子扩展到TCR分子，能够制造出以高亲和力结合MHC/肽复合物的TCR四聚体。与TCR单体相比，TCR四聚体的亲和力更高，可以延长TCR: pMHC相互作用的半衰期，因此TCR四聚体与MHC四聚体一样，成为了分析TCR-MHC相互作用的理想试剂，助力研究者们在免疫学相关领域的研究。
TCR四聚体的潜在应用
① 检测靶细胞
② 鉴定交叉反应表位多肽及评估多肽间的相对亲和力
③ 研究T细胞和抗原呈递细胞之间的相互作用
④ 鉴定病毒感染细胞
⑤ 竞争性抑制抗原特异性CTL的激活
TCR四聚体的制备
① 可溶性TCR链的生成：分别将TCR的两条链(α链和β链)构建在两个不同的表达载体中，并将生物素化位点的序列融合到TCR β链的C端，使TCR β链可以被生物素化。通过细菌表达系统（大肠杆菌）表达重组蛋白，分别获得TCR的α链以及生物素化的β链 。
② 重新折叠可溶性单体TCR：纯化的TCR α链和β链在一定环境中折叠数天，以获得可溶性TCR单体。
③ TCR单体的纯化：通过层析柱纯化，获得纯度较高的TCR单体。
④ TCR单体的四聚体化：将偶联了荧光染料的链霉亲和素添加到单体中，TCR单体被四聚化，形成稳定的TCR四聚体试剂。
TCR四聚体染色实例
＞例1: 细胞染色（ Survivin-2B TCR-Tetramer)
改造HLA-A缺陷型的C1R细胞，使其稳定过表达HLA-A*24:02（此后该细胞称之为C1R-A24)；细胞经过survivin-2B抗原肽(AYACNTSTL)刺激4小时后使用HLA-A24抗体[Anti-HLA-A24(Human)mAb-FITC, Code No. K0209-4]和TCR四聚体[Survivin-2B TCR Tetramer]进行染色。
流式结果显示，C1R-A24细胞在抗原肽刺激后，HLA-A24⁺／四聚体⁺细胞在总细胞中占比为96.42%。
＞例2: pMHC结合磁珠染色（Survivin-2B TCR-Tetramer)
将生物素化的pMHC单体[HLA-A*24:02 survivin-2B (AYACNTSTL)]与亲和素磁珠进行偶联，制备MHC四聚体包被磁珠。通过控制pMHC原料单体和磁珠的配比，使不同组磁珠具有不同的包被量，以此模拟不同细胞的pMHC丰度差异。
使用Survivin-2B TCR四聚体对加载有不同数量pMHC的磁珠染色后进行流式检测，TCR四聚体阳性数据以直方图进行显示，未加载pMHC的磁珠设为阴性对照(R=0)。
结果可见TCR四聚体的检出信号强度与磁珠上加载的pMHC数量呈正相关。
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