单克隆抗体是流式抗体的核心原料,单克隆抗体与荧光染料偶联后经纯化,获得用于流式检验的荧光标记抗体,故单克隆抗体的活性很大程度上决定了流式抗体的品质。而单克隆抗体的活性高低与其保存条件密切相关,如保存不当,抗体的品质将大大下降。
通常,在不含防腐剂(如Proclin 300、叠氮钠等)的缓冲液中,无标记物的纯品单克隆抗体在4℃只能短期稳定储存,长时间的稳定储存则需要-20℃或-80℃。然而在冷冻过程中,尤其是反复的冻融会降低抗体的有效浓度并且容易产生沉淀,直接影响了抗体的使用效果。研究发现反复冻融5次后,抗原回收率开始迅速下降[1]。抗体和抗原本质都属于蛋白,在冻融时表现出相似的特性。
图片来源于参考文献[1]
为解决这个问题,四正柏经过多年冻干工艺优化,开发出干粉形式纯品单抗。相较于传统液体抗体,干粉抗体具有更高的稳定性,可在-20℃、-80℃条件中长时间保存(长达数年),4℃保存时效也大幅提升,便于纯品抗体的运输及保存。
为了保护单克隆抗体在冻干过程中的质量和活性,我们添加海藻糖作为冻干保护剂。为保证海藻糖对抗体后续的荧光标记无影响,确保流式抗体的质量,我们以CD19纯品抗体(货号FHU019-01)为例进行了冻干抗体荧光标记效果的对比:分别使用含有海藻糖(1%海藻糖+PBS)和不含海藻糖(PBS)的缓冲液进行CD19纯品冻干,然后同时对两种冻干抗体进行复溶并进行PE荧光素的标记,以人外周血为样本进行PE标记抗体的滴度测试,判断其抗体性能。
结果发现,海藻糖的存在并不影响CD19抗体的荧光标记性能:在两组检测结果中,计算染色指数(SI)选择合适的抗体浓度时,两组的SI指数变化趋势一致,均提示0.06µg/T为最适浓度,且该浓度下细胞分群效果接近。表明添加海藻糖制备干粉抗体不会影响抗体活性。
那么,干粉形式的抗体其保存效果如何呢?我们通过一组加速稳定性实验来展示:以CD3抗体(货号FHU003-01)为例,将干粉抗体储存于37℃环境中,定期在预设的储存时间取出干粉抗体样品,纯水复溶,标记荧光素FITC,检测其抗体活性。结果发现,在37℃保存8周(即相当于4℃保存一年半)后,使用该纯品抗体标记获得流式抗体,依然能准确对外周血样本中的淋巴细胞进行分群,分群结果与0周时基本一致。抗体滴度实验结果一致,均反映0.25µg/T是最适浓度。
根据上述验证结果,我们可以看到选择干粉形式对纯品抗体进行保存是一种相对稳定的保存方式。不仅能够保证在常规-20℃、-80℃条件下长时间保存(长达数年),且没有反复冻融的风险。干粉抗体对于需要大批量购买抗体,或对批间差控制要求较高的用户来说,是十分有利的产品形式。
而且,干粉抗体在4℃保存也较为稳定,有助于抗体的长时间运输。对于液体形式抗体来说,抗体从厂家发出4℃运输,运输后客户保存至-20℃,待使用时再次溶解,这个过程涉及2-3次的冻融,一定程度上会影响抗体的活性与回收率。而干粉形式的抗体在这个过程中不存在冻融的风险,还能延长在4℃的保存时间。当意外情况导致运输周期延长,抗体需在4℃或更高温度环境(如夏季)放置一段时间,也不必担心抗体的活性受到影响。
目前我们可提供干粉形式的纯品抗体,在不影响抗体活性的基础上,能提供更好的抗体运输和保存体验,全面满足客户的需求,提供更优质的抗体服务。
[参考文献]
[1] Kifude C M, Rajasekariah H G, Sullivan Jr D J, et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Plasmodium falciparum histidine-rich protein 2 in blood, plasma, and serum[J]. Clinical and vaccine immunology, 2008, 15(6): 1012-1018.