BMSCs介绍
BMSCs即为骨髓间充质干细胞,是骨髓中基质细胞,是骨髓的支持结构,并可作为滋养层支持骨髓中造血干细胞的生长,因此也被称为骨髓基质干细胞。作为干细胞的一种,它同样具有多向分化潜能,在一定的环境和细胞因子的作用下,可被诱导分化为骨细胞、神经元样细胞、脂肪细胞、软骨细胞、心肌细胞等。其可被定义为具有多分化能力并且能自我更新复制的骨髓间质细胞。其各项优点,使得它在临床干细胞移植治疗中显示出极大的应用前景。目前己广泛使用在修复软骨损伤、神经细胞再生等领域。
大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养技术流程
一、实验器械及试剂准备:
实验开始前,将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿,15ml 离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台,以紫外线照射 30min。
1. 选取 SPF 级,体重 100~150g 左右的SD 大鼠,断颈处死。将大鼠置于体积分数为 75%的乙醇中浸泡 5 min。
2. 工作台紫外消毒后,采用通风机通风 3min。以 75%酒精擦拭操作台和双手。
3. 无菌条件下,准备好大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子、干净培养皿。将大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。
二、 全骨髓提取 :
1. 眼科镊沿腹股沟处提拉大鼠皮肤,眼科剪刀剪开腹股沟皮肤,暴露腿部肌肉,从关节处将大鼠大腿剪下。除去骨表面附着的软组织,置于另一无菌培养皿中。
2. 假如在平时操作中,剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净,可采用无菌纱布擦拭,可方便的将肌肉组织剔除干净,提高所分离细胞的纯度。
五、细胞传代
六、细胞观察
细胞传代到第 3 代时,生长融合后,细胞形态均一,呈长梭形集落样分布,并可重叠生长,细胞纯度可达 95%以上。此时细胞可用于后续实验,或采用表表面标志物进一步验证其纯度:验证标准为CD34 阴性,CD44 阳性。
注意事项