流式细胞术在医学诊断与科研探索中具有不可替代的价值。然而，样本保存始终是限制检测准确性的关键因素。常规方法如：

外周血/骨髓：多采用肝素或 EDTA 抗凝，室温需在 12 小时内完成检测，即使 4℃保存也不宜超过 48 小时；

淋巴结组织等：通常置于生理盐水或 PBS 中，但无论室温或 4℃，均难以长时间维持稳定。

这种局限性已无法满足日益复杂的实验与临床需求，亟需更优的保存策略来延长样本稳定性、维持细胞活性和抗原特性，从而确保检测结果的精准可靠。

在此背景下，四正柏创新研发出细胞保存液：

全方位保护：自样本采集（骨髓、外周血、淋巴结组织等）起，即能有效维持抗原表达稳定性；

广泛适用：适用于免疫分型、淋巴细胞亚群分析、PNH 检测等多类项目，确保检测结果稳定与正确，减少误诊风险；

临床价值：尤其在处理罕见病例或抗体供应不足的情况下，保存液可延长样本可用时间，为后续补充抗体标记、完善检测流程提供可能。

此外，该保存液具有细胞固定作用，保存时长最长可达 4 周。需注意，保存后的样本不再适用于细胞培养，仅限体外流式分析。

凭借此优势，实验人员可实现多次采集、集中检测，既节省时间与人力，又规避了因多批次处理及试剂差异带来的结果偏差，为科研和临床提供更高效与可靠的解决方案。

实验一：保存液对人外周血细胞保存效果的验证实验

实验方法：

将同一份血样分为 5 份，分别保存于四正柏细胞保存液中；

在第 0、3、6、10、14 天取样，每次取 100 μL；

加入 CD3-FITC、CD8-PE、CD4-APC、CD45-PerCP 抗体进行染色

染色完成后上机检测，分析细胞比例及荧光强度变化。

实验结果如下：

B细胞保存结果：

B细胞检测结果分析：

1、加保存液后，3天内所有试剂均符合YY/T1184-2010技术要求，阳性百分比10-30%时，相对偏差不大于20%

2、加了细胞保存液的样本，相比较而言，CD19-PE/Cy7比CD19-APC更稳定。

3、外周血或全血必须加CD45抗体设白细胞门，否则会引起设门不准，从而导致实验数据错误。

T细胞保存结果：

T细胞检测结果分析:

加保存液后，3天内所有试剂均符合YY/T1184-2010技术要求，阳性百分比10-30%时，相对偏差不大于20%；阳性百分比大于等于30%时，相对偏差不大于10%；

NK细胞保存结果：

1、由于CD16+56为连续峰，分群不明显，建议实验时加同型对照；

2、加保存液后，3天内NK细胞（（CD3^-CD16+56⁺））比例均符合YY/T1184-2010技术要求，阳性百分比小于10%时，相对偏差不大于30%；NKT细胞（CD3⁺CD16+56⁺）变化较大。建议根据1的建议设同型对照，再次验证。

DC细胞保存结果：

1、加保存液后，用CD45设门，3天内DC细胞比例符合YY/T1184-2010技术要求，阳性百分比小于10%时，相对偏差不大于30%；

2、外周血或全血必须加CD45抗体设白细胞门，否则会因设门不准导致的实验数据错误。

总结：血液样本加入细胞保存液3天内，用CD45设门，检测T，B，NK，DC均符合YY/T1184-2010技术要求。

2.1胞内指标检测：

实验设计

对比产品：四正柏细胞保存液 vs 国外 3 个主流品牌（A、B、C）

条件：室温 & 4℃ 保存

时长：14 天

指标：

FSC、SSC → 细胞大小 & 胞内颗粒度变化

CD3-FITC / CD8-PE / CD45-PerCP / CD4-APC 染色 → 阳性细胞比例 & 平均荧光强度

细胞分类保持情况（FSC+SSC）

室温保存的EDTA血在第7天起，已无法分出粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。

淋巴细胞群：品牌A变化最明显，四正柏居中。

粒细胞&单核细胞：品牌B在室温变化最大，品牌C稳定性较好，四正柏居中。

FSC变化（细胞大小）

粒细胞&单核细胞：四正柏保存效果最好，且室温与4℃差异不大。

淋巴细胞：品牌A在室温下变化最小，其次品牌B。

四正柏在4℃保存时，前4天变化小，但随着时间延长，变化逐渐增大。

SSC变化（颗粒度）

4℃保存效果明显优于室温，尤其6天后差异更大。

四正柏在粒细胞 & 单核细胞保护作用居中，但在淋巴细胞保护上优于国外品牌。

阳性细胞比例

无保存液：第4天起差异性>10%；4℃保存至第7天也 >10%。

品牌A：第3天即出现>10%差异，表现最差。

品牌B &四正柏：表现最好，14天差异仍 <10%，稳定保存效果显著。

平均荧光强度（MFI）

室温保存下降明显大于 4℃。

品牌B &四正柏表现更好，抗原荧光强度保持较稳定。

综合结论：

国外品牌在“形态保持”略占优势；四正柏在“流式检测可靠性（表面 marker 分析）”上表现突出，与国际主流品牌相当，甚至在 B 细胞和 T 细胞标记稳定性上更具优势。

2.2核内指标的检测：

各品牌的细胞保护液，均不适合做核内抗体流式实验。

实验方法：

1、将同一批细胞保存液分成4份，分别处理为：

① 室温（24℃）放置3天+4℃放置6天；

② 室温（24℃）放置7天+4℃放置2天；

③ 室温（24℃）放置9天；

④ 4℃放置9天。

2、取同一份人外周血样本分成 4 份，分别加入上述 4 种条件处理后的保存液中进行保存。

3、于第0天和第3天，分别从每组保存液中取100 μL血样，分装至流式管中；加入以下抗体混合物进行染色：

FITC anti-human CD3（10 μL）

PE anti-human CD8（10 μL）

APC anti-human CD4（10 μL）

PerCP anti-human CD45（10 μL）

染色完成后上机检测并分析细胞亚群分布。

实验结论：保存液在室温条件下放置 9 天后，仍能保持良好的稳定性。检测结果显示，T 细胞、Th 细胞及 Tc 细胞的百分比及分群情况与对照组相比无显著差异。