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14-3-3诱导的细胞内信号传递PCR阵列-小鼠 (PCR Array)，货号：WC-MRNA0164-M
一、商品描述
产品内容
品 名： | 14-3-3 INDUCED INTRACELLULAR SIGNALING PCR Array plate |
种 属： | MOUSE |
货 号： | WC-MRNA0164-M |
规 格： | 96孔板 |
品 牌： | Wcgene® biotech |
产 品： | 96孔引物预置板，封板膜，说明书 |
储 存： | -20℃ |
有效期： | 六个月 |
生产日期： | 见外包装 |
使用限制： | 本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。 |
基因列表
MOUSE | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | AKT1 | ERBB2 | IL6 | MAP2K3 | MAPK12 | MRAS | PLCB1 | PRKCD | RPS6KA5 | TNF | TUBA8 | YWHAG |
B | AKT1S1 | FOS | INSR | MAP2K4 | MAPK14 | NRAS | PLCB2 | PRKCE | RPS6KB1 | TNFRSF1A | TUBB1 | YWHAH |
C | BAD | GRB2 | JUN | MAP2K5 | MAPK3 | PIK3C2A | PLCD1 | PRKCQ | RPS6KB2 | TP73 | TUBB2A | PRKCB |
D | CBL | GSK3B | KDR | MAP2K6 | MAPK6 | PIK3CA | PLCE1 | PRKCZ | RRAS | TRAF2 | TUBG1 | RPS6KA3 |
E | CD55 | HRAS | KIT | MAP3K5 | MAPK7 | PIK3CB | PLCG1 | RAF1 | RRAS2 | TSC1 | VIM | TGFB1 |
F | CXCL12 | IGF1 | KRAS | MAPK1 | MAPK8 | PIK3CD | PLCG2 | RPS6KA1 | SNCA | TSC2 | YAP1 | TUBA4A |
G | EGFR | IGF1R | MAP2K1 | MAPK10 | MAPK9 | PIK3R1 | PRKCA | RPS6KA2 | SRC | TUBA3C | YWHAB | YWHAE |
H | ELK1 | IL2 | MAP2K2 | MAPK11 | MAPT | PIK3R2 | ACTB | GAPDH | HPRT1 | 18s | NTC | NTC |
二、检测原理
实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取 SYBR 荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入 SYBR 荧光染料，SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。
产品介绍
PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。
WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。
流程图
三、操作步骤
1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：
RNA： | 无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0 |
cDNA： | 严格按照所用试剂盒说明书操作 |
cDNA原液预实验内参范围： | ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右 |
*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA
2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。
3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。
表a. cDNA和mix混合液配方表
组成成分 | 96孔（搭配96孔板,每孔9 μl） |
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×） | 510 μl |
cDNA sample | 100 μl |
无RNA酶ddH2O | 290 μl |
ROX Reference Dye（50×） | 20 μl |
总体积 | 920 μl |
4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示
表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）
循环 | 温度 | 时间 | |
预变性 | 1 | 95℃ | 30 sec |
变性 | 40 | 95℃ | 5 sec |
退火延伸 | 40 | 60℃ | 30 sec |
熔解曲线分析 | |||
5. 上机开始Real Time PCR反应
6. 结果导出，数据分析
四、适用仪器
芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）
Plate format | Instrument provider | qPCR instrument model |
A (96 well) | Roche Applied Science | LC480 |
Bio-rad | CFX96 | |
B (96 well) | Applied Biosystems | 7500， 7900HT， ViiA 7 |
C (96 well) | Applied Biosystems | 7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System |