抗体是生物学科研工作中最有力的工具,没有之一。抗体广泛应用于与免疫检测相关的研究技术中,包括免疫印迹、免疫组化、酶联免疫吸附检测、免疫沉淀和流式细胞检测等。据Baker M. (2016)《Nature》统计,超70%的生物学家无法重复他人的实验结果,超50%无法重复自己的实验结果。其中抗体相关研究一直存在严重的“重现危机”,对生物医学研究的可重复性造成了显著不良影响,抗体试剂的质量和性能一致性问题是导致实验不可重复的罪魁祸首之一。
Madhusoodanan ( 2014年)和Rhodes & trickers ( 2008年)证实,在用于验证抗体的所有方法中,敲除验证的可接受性和可信度都很高。基因敲除 (Knockout, KO) 验证基于KO样品或细胞系的使用,KO样品或细胞系是一种不表达目的蛋白的样品或细胞系,因为负责编码它的基因已经被敲除或消除。在 KO 细胞系中测试特异性抗体时,特异性抗体不会产生信号,但在野生型 (wild type, WT) 细胞系测试特异性抗体时,特异性抗体会产生特异性目的蛋白信号。以这种方式,KO 验证作为真正的阴性对照,以确认抗体对目的蛋白的特异性( bordeau等,2010年)。
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