前言

1、葡萄糖

•葡萄糖浓度代表什么？

•培养基中的葡萄糖浓度范围从1g/L（5.5mM）到10g/L（55mM）

•5.5mM的葡萄糖浓度与体内正常血糖的浓度类似

•高糖培养基可以满足肿瘤细胞等非生理状态细胞的体外培养需求

•选择高糖还是低糖培养基？

•根据不同细胞类型选择

通常原代细胞、干细胞使用低糖培养基

永生细胞系等病理状态的细胞使用高糖培养基

2、丙酮酸钠

•作用

•葡萄糖不足时为细胞提供碳源

•直接进入三羧酸循环，可以被快速利用

•什么情况下添加丙酮酸钠？

•之前培养条件已含有丙酮酸钠

•代谢旺盛的细胞

丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM。

3、酚红

•pH值指示剂

•培养基颜色的变化帮助细胞培养者判断是否需要换液等操作

•什么情况下建议选择无酚红培养基？

酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），干预某些细胞在克隆级密度时生长。为避免固醇类反应，在干细胞培养或者进行低密度细胞生长时，应使用无酚红的培养基。

4、HEPES

•作用

•稳定pH值

•本身没有营养价值，会提高渗透压，并降低酚红对pH值的指示作用

•什么情况下需要加HEPES？

•培养条件pH波动剧烈

•细胞对pH敏感

Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM

5、谷氨酰胺

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有胶高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

试验操作中常配制高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分装使用，-20℃保存。使用时，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中，使其终浓度为2mM培养基。

误区：培养基中的谷氨酰胺容易降解，需要不断补充

正确方案：如果正确使用，一般不需要补加，如：4℃避光保存；分装，不要反复预热。

6、NaHCO₃

•作用

与CO₂一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

7、GlutaMAX^TM

•GlutaMAX^TM 完美替代L-谷氨酰胺

•极为稳定，可常温、2~8℃以及-5~-20℃保存

•毒性氨积累最小化

•使细胞的性能达到最佳

•提高细胞成活和生长

•建议不要将其用于昆虫细胞培养

•由于释放谷氨酰胺有一定的延迟，不建议用于刚复苏的细胞