如何获得更好的细胞培养效果

•保证良好的细胞培养环境

•选择合适的培养体系，争取配制和保存培养基

•注意传代时间，密度和解离操作

•及时冻存细胞，注意冻存和复苏操作

无菌技术

•污染的来源

非无菌物品、培养基和试剂、带有微生物的空气颗粒、不干净的培养箱和污染的工作台面

•无菌技术

通过一套操作流程降低培养物被上述污染源污染的可能

•无菌技术组成要素

无菌工作区域

无菌操作

无菌试剂和培养基

良好的个人卫生

无菌工作区域

无菌操作

•进行无菌操作时佩戴手套和口罩

•用70%乙醇擦拭双手和工作区域

•在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入细胞培养通风橱

之前，用70%乙醇擦拭其外部

•必须使用无菌器皿和设备

•无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子，操作完成后尽快盖上盖子

•选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：

首选：建立该细胞株所用的培养基

参考：文献

尝试：实验室常用的培养基

按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择

最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐

•葡萄糖浓度代表什么？

•培养基中的葡萄糖浓度范围从1g/L（5.5mM）到10g/L（55mM）

•5.5mM的葡萄糖浓度与体内正常血糖的浓度类似

•高糖培养基可以满足肿瘤细胞等非生理状态细胞的体外培养需求

•选择高糖还是低糖培养基？

•根据不同细胞类型选择

通常原代细胞、干细胞使用低糖培养基

永生细胞系等病理状态的细胞使用高糖培养基

•丙酮酸钠作用

•葡萄糖不足时为细胞提供碳源

•直接进入三羧酸循环，可以被快速利用

•什么情况下添加丙酮酸钠？

•之前培养条件已含有丙酮酸钠

•代谢旺盛的细胞

•HEPES作用

•稳定pH值

•本身没有营养价值，会提高渗透压，并降低酚红对pH值的指示作用

•什么情况下需要加HEPES？

•培养条件pH波动剧烈

•细胞对pH敏感

•L-谷氨酰胺

如果正确使用，一般不需要补加

•4℃避光保存

•分装，不要反复预热

•细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时即应进行传代

选择合适的解离试剂

•胰酶（Trypsin）：猪胰蛋白酶

•TrypLE（Trypsin-Like Enzyme）

•利用微生物生产的动物胰蛋白酶替代物

•温和、方便、无动物来源成分

•指导原则

•高细胞浓度和活性

•缓慢冷冻，每分钟降1℃

•轻柔操作

•冻存培养基

•含DMSO或甘油等冷冻保护剂

•完全冻存培养基

•Synth-a-Freeze

•指导原则

•迅速解冻

•轻柔操作

•高密度接种