HyCyte™ 海星生物技术服务指南

一、非病毒法——VI RUS-Free™基因导入系统

VI RUS-Free™是一种利用转座子系统进行细胞稳转株的构建和筛选的技术。其载体中包括了转座子的识别区域，在转座酶的催化下，将目的片段从载体上或者BAC分子上切割下来形成一个小环结构，并在基因组里面的特定位置进行插入,从而实现稳转。目前已经在CAR-T细胞治疗中得到较多的临床应用，充分体现出其：低成本、高效率、基因表达稳定的特点。

应用范围：

案例：人结直肠癌细胞HCT116/GFP稳转细胞株

细胞基因片段敲除/ Western Blot有保障

二、ClonePlus™培养技术

细胞的克隆形成是一个缓慢而且效率很低的技术过程，但是很多细胞实验都需要经过一个单克隆生长阶段，为了增加细胞株的克隆形成的

效率，我们研发了该款细胞培养基。ClonePlus™培养基含有多种细胞培养添加成分，包括：

海星生物使用ClonePlus™培养基测试多种工程细胞株、肿瘤细胞株、原代细胞株、干细胞株等都能提高20〜150%的克隆形成效率(数据 来自同一株细胞对比)。

三、CRISPR基因编辑技术

Cas9蛋白对靶位点的DNA双链进行切割，产生双链断裂(DSB),绝大多数情况下(>80%)，细胞采用NHEJ修复路径，使得靶位点位置随机产生个别碱基的删除或插入(Indel)，当Indel发生编码区域且为非3倍数时，得到基因敲除模型。

极少数情况下(<10%),且细胞内存在同源片段时，细胞采用HDR修复路径，使得靶位 点产生精确修复；在同源片段中引入外源基因片段或者突变碱基，可得到基因定点插入模型或者基因定点突变模型。

四、细胞实验服务

细胞生长曲线	细胞划痕		细胞凋亡

五、CDX动物模型

六、PDO类器官

患者来源肿瘤类器官(Patient-derived Organoids，PDO)是一种强化患者与药物筛选相关性的新模型，能够如实地概括其亲代肿瘤的基因组、形态和病理生理学特征。PDO模型与传统的体外模型相比，患者相关性更高，可以加快药物研发速度并降低候选药物的高失败率，已经广泛应用于药物筛选、疾病研究、新药研究等领域。

临床研究表明，类器官在预测药物临床响应性方面，预测药物有效性阳性率88% ，预测药物无效或耐药率100%。

患者衍生的类器盲(PDO)技术流程

案例：肝癌类器官模型检测药物MSJY-01、MSJY-02、MSJY-03活性（周期：15个工作日）

	HCC-28模型候选药测活结果:MSJY-03敏感,MSJY-02轻度敏感,MSJY-01不敏感。

HCC-28模型信息展示                代次：P3代            基因型：ROS1基因重排

HE	CDX-2	KERATIN	药物敏感/耐药信息
HE染色余免疫组化			感药物：索拉菲尼，乐伐替尼，药A，药B；耐药：5-FU，顺铂

已有的部分PDO模型:

七、载体与病毒

八、CRISPR-gRNA文库筛选服务

CRISPR-gRNA文库是高通量筛选靶基因的重要工具，可用于大规模或全基因组功能筛选，涉及信号通路、疾病、细胞药物应答、发育、基因调控等方面。

海星生物在gRNA文库筛选方面拥有丰富的经验，能够帮助客户快速构建CRISRP K0 （基因敲除）、CRISPRa （基因激活）、CRISPRi （基因抑制/沉默）文库等各种文库，也可以为客户提供全套的细胞功能筛选服务，涵括文库构建、病毒文库、细胞转染和筛选、NGS测序与数据分析服务。

海星生物提供现货Human和Mouse全基因组范围的基因敲除（CRISPR-KO） gRNA文库，靶向特定通路或基因的gRNA订制文库。

九、CRISPRa（基因激活）服务

具体案例（HEK293 PDGFRB基因激活）

十、CRISPRi （基因抑制/沉默）服务

CRISPRi vs RNAi 研究基因功能最常见的方法是:减少或者阻断基因表达，然后进行表型分析。 CRISPRi和RNAi都是常用的基因表达水平敲低的研究工具。 RNA干扰（RNAi）靶向细胞质中成熟的RNA， 而CRISPRi则在细胞核内阻止转录的起始，因而敲低效果更为显著。 此外，CRISPR的脱靶效应要远远低于RNAi。

十一、微生物基因编辑服务

后基因组时代一项重要的任务是研究并挖掘基因的功能，微生物也一样，即使是模式大肠杆菌仍有一半以上的基因为未知功能。对微生物基因组进行遗传改造，是真正实现驾驭微生物，为我所用的必须步骤。

应用范围