【海星】预筛选胎牛血清买10送1,使用中的常见问题解答在这里!

诺扬生物
2025-03-13

胎牛血清在生物医学研究,以及细胞培养领域中,应用广泛。胎牛血清含有丰富的生长因子、蛋白质和其他生物分子,对细胞生长和增殖具有重要作用。所以血清的种类和品质对于细胞的生长产生极大的影响。

下面将针对血清如何储存、融化、为何出现沉淀以及如何减少沉淀做出详细分析。希望能帮助您解决血清使用上出现的问题。

Q1. 血清长期储存的条件和方法

血清如需长期保存,则必须储存于-10℃或更低温冰箱中,建议存放于-20℃的冰箱中。研究表明储存在-80℃条件下的血清在性能方面变化不大,但由于解冻时温差过大,会导致析出更多沉淀,使得背景杂乱,因此血清长期保存不建议处于-80℃条件下。如果近期会频繁使用血清,我们建议不要在4℃条件下存放超过1个月,若一次无法用完整瓶建议分装后保存,且要避免反复冻融。另外,血清冰冻后体积会增加约10%,因此血清分装时请留意预留一定的体积空间。


Q2. 如何进行血清的程序性解冻?

程序性解冻血清可以确保血清制品质量的稳定性,且不会因为温差过大而析出过多蛋白等沉淀。程序性解冻方法是于实验开始之前将冷冻的血清置于4℃冰箱中融解,并且在解冻过程中每隔1小时摇匀一次,使温度与成分均一,减少沉淀析出,直至全部解冻,然后再移入室温条件下使用。


Q3.血清解冻后发现絮状沉淀该如何处理?

造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。


Q4.血清沉淀是什么?

血清非人工产品,沉淀出来系自然现象,沉淀主要是纤维蛋白原,其次是盐析出。如磷酸钙等,还有一些胆固醇和脂肪酸以及其他蛋白析出物质等。

沉淀不会影响其对细胞的促生长作用:技术人员对此问题有过深入研究证明,血清沉淀对细胞的生长没有影响,但有一个例外:沉淀对巨噬细胞的培养会有一些影响。

Q5.哪些因素血清沉淀会增加?

血清热灭活、37℃培养 、反复冻融、溶解过程中没有摇匀、伽马射线照射、长期存放在 2-8°C、血清加入到RPMI 1640中时、pH升高时、在培养板或培养皿中,培养基的蒸发等等因素都会导致沉淀的增加。

Q6. 如何避免血清中产生沉淀?

1.解冻时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一;
2.分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡);
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴锅解冻,较大的温差,易造成蛋白质凝结而发生沉淀;
4.切勿将血清置于37℃过长时间,否则可能使之浑浊,其中一些不稳定的组分也会因此受到影响,最终降低血清的品质;
5.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤;
6.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且保持摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。


Q7.血清中的小黑点是什么?

血清解冻过程温差过大、经反复冻融或通过热灭活处理后更容易产生沉淀,这些沉淀物在镜下观察时有一些会呈现以布朗运动的小黑点,业内流行一种“黑胶虫”污染的说法,但“黑胶虫”一直以来都是极为神秘的存在,至今科学家们也没有完整的实验结果可以证实它究竟是一种生物还是非生物,更有人认为“黑胶虫”是血清的原虫,或误以为是细菌或真菌污染。但科学家通过进一步的研究发现它们更可能是血清中的蛋白结晶。这种结晶可能为蛋白析出,如纤维蛋白原凝结成纤维蛋白;或是盐析出,如磷酸钙等;也有一些是胆固醇和脂肪酸。以下图片就证实了这一说法,如纤维蛋白和磷酸钙。


Q8.血清是否需要热灭活处理?

血清是否需要灭活取决于您的应用。加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES 细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

热灭活是指56℃, 30分钟加热已彻底冻结的血清。加热过程中须规矩摇晃均匀。目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非有必要,一般不建议做此热处理,因为热处理会形成血清沉积增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有: 平滑肌细胞收缩、 肥大细胞和血小板释放组胺、 增强吞噬作用、促进淋巴细胞和巨噬细胞发作化学趋化和活化。相关研究的使用者可以考虑血清增加热灭活处理。


Q9.如何进行血清灭活处理?  

血清请先按上述「血清应如何融解」中的操作步骤融化和混匀,热灭活时请将血清置于 56 ℃ 水浴 30 分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响,一次灭活的血清体积不宜过大。最好准备同样的容器装相等体积的水(与血清相同温度),灭活时将装有血清和水的容器同时放入 56 ℃ 水浴, 在装水的容器中放置温度计,加热过程中不时轻轻旋转混匀血清,当温度计显示达到 56 ℃ 左右,开始计时。56 ℃ 水浴后,建议马上转移到冰上降温。


Q10.血清在4度冰箱能放多久?对细胞有何影响呢?  

根据文献显示血清和血浆在4℃条件储存2小时,血清中的成分就会发生变化,所以建议用户在使用血清要分装成自己常用的规格,建议现配现用。如果不能实现现配现用的话,配好的完全培养基在4℃保存的时间不要超过1周,如果期间使用频次较高或恢复室温次数较多时,能够保存的时间还会减少。


Q11.血清使用浓度是多少?

原则上血清添加量不要太多,通常分为5%、10%、20%几档,部分细胞原代提取时会使用20%血清,大部分细胞正常培养时会使用10%的血清浓度。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度,还需要根据细胞特性、实验目的做测试和调校。


Q12.如何选择批间差小的胎牛血清?

血清批间差是客观存在的,因为血清制品来源于天然活体,供体牛只的生理状况、健康状况均不同,且受饲养环境的地形、风貌、饮食、水源等影响,体内各类蛋白、生长因子和酶类的含量均有巨大差异,所以血清具有含量复杂且不固定的特性,批间差异也是有可能的,因此选择批间差异小的血清不仅可以保证血清质量,确保细胞培养效果,还能减少由于批间差异带来的使用前测试,且避免实验结果的不可重复性。


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