相信很多小伙伴们
都做过蛋白过表达实验,
利用转染试剂将
携带目的基因的质粒导入培养细胞中。
那大家肯定对Lipo2000等转染试剂很熟悉,
这些转染试剂往往价格昂贵,
细胞毒性又较高,容易影响转染效果。
而今天,小雅又要给伙伴们带来一位“新宠”!
它就是
雅酶蛋白过表达试剂盒
货号:ZC101
与Lipo2000相比,ZC101有哪些优势呢?
01
性价比高,以六孔板为例,ZC101的转染成本仅为Lipo2000的1/5;
02
配备赠品,ZC101配有表达胞内蛋白GFP、跨膜蛋白KCNQ4和胞外蛋白MBP的质粒,可作为参照质粒直接进行细胞转染,另外还赠送Flag直标抗体,方便操作者进行WB检测;
03
适配性强, Lipo2000需搭配Opti-MEM培养基方能达到最佳使用效果,增加操作者的隐形成本;而ZC101只需搭配使用培养目的细胞的培养基(不加血清)即可;
04
细胞转染后无需换液,只需添加表达增强剂(ZC101中组分)即可;
05
转染效果佳,使用ZC101的蛋白表达量不仅能与Lipo2000持平,而且多数情况下优于Lipo2000。
有了这位“新宠”,您的过表达实验一准飞黄腾达,下面咱们就来看看ZC101的实验效果吧!
PART.01
实验结果分享
分别使用ZC101和Lipo2000在相同细胞数的Expi293F和CHO-S细胞系中转染相同质量的GFP表达质粒。转染后36h,使用流式细胞仪检测细胞的GFP蛋白表达阳性率。
结果表明:如图1所示,对于两种不同的悬浮细胞系,使用ZC101过表达GFP的细胞阳性率显著高于Lipo2000。
图1,悬浮细胞系中GFP蛋白表达的流式细胞术检测结果
接下来,使用ZC101和Lipo2000在相同细胞数的不同种类贴壁细胞中过表达GFP蛋白,36h后使用荧光显微镜观察蛋白表达情况。
结果表明:如图2所示,在Hela和HEK293T细胞系中,ZC101和Lipo2000的效果旗鼓相当;而在COS-7、MCF-7、NIH/3T3和HepG2细胞系中,使用ZC101的GFP表达效果显著优于Lipo2000。
图2,贴壁细胞系中GFP蛋白表达的荧光显微镜观察结果
最后,在不同的细胞系中使用ZC101和Lipo2000过表达胞内蛋白GFP,跨膜蛋白KCNQ4,以及分泌蛋白蛋白MBP。36h后,取相同体积的细胞裂解液或细胞上清通过标签抗体进行WB检测。
结果表明:如图3所示,在Hela和HEK293T细胞系中,蛋白表达量相差不大;而在Expi293F、CHO-S、NIH/3T3、Hep G2、COS-7和MCF-7细胞系中,与Lipo2000相比,使用ZC101过表达蛋白量更高;综合比较,使用ZC101的平均蛋白表量高于Lipo2000。
图3,不同细胞系过表达蛋白后的WB检测结果
PART.02
使用注意
1
不同的细胞系对表达增强剂(ZC101中组分)具有不同的耐受性。
以NIH/3T3细胞为例,转染细胞加入不同浓度的表达增强剂24h后,细胞状态会有所不同。如图4所示,随着表达增强剂浓度的不断降低,圆形非贴壁的悬浮细胞数量逐步减少。因此,若转染的细胞对表达增强剂较为敏感,建议将其使用终浓度由6%降为3%。
图4,不同浓度表达增强剂对过表达GFP的NIH/3T3细胞的影响
2
转染用的质粒必须是无内毒素提取的质粒。
3
雅酶生物自研标签抗体推荐:
非直标抗体货号 | 直标抗体 货号 | |
His-tag | LF307 | LF307-HRP |
Strep-tag | LF316 | LF316-HRP |
Flag-tag | LF303 | LF303-HRP |
产品信息规格
货号 | 名称 | 规格 | 价格 |
ZC101 | 蛋白过表达 试剂盒 | 100次 | 498元 |
ZC101L | 500次 (ZC101×5) | 1980元 |