在科学研究中，高效地从组织或细胞中提取蛋白对于后续的分析至关重要。雅酶生物为此提供了全面的解决方案：

15款产品详细介绍和实验小贴士给您一 一道来：

本产品可以从动物细胞或组织中方便高效地分离细胞膜蛋白和细胞浆蛋白，其提取的膜蛋白不仅包括质膜的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等的膜蛋白。

产品特点

• 速度快——可在约90min内完成膜蛋白提取

• 得率高——采用新型优化的去污剂配方，可从5×106个细胞中提取约0.4~0.6mg的膜蛋白(不同细胞系中膜蛋白含量有所差异)，得率比一般试剂盒高30%~50%

• 纯度佳——交叉污染率极低(通常低于10%)，仅会在膜蛋白组分中掺入极少量细胞溶质蛋白

• 易操作——细胞样品不需要匀浆和液氮冻融等方式进行处理

• 高兼容——膜蛋白提取物可用于BCA蛋白定量、SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀等后续实验

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实验中的表现：

1.膜蛋白提取结果对比（western Blot)

将4种膜蛋白（单体分子量分别为70kDa、80kDa、100kDa和40kDa）过表达于HEK293细胞，分别取等量的细胞（5×106个）使用3种不同品牌试剂盒进行膜蛋白提取，使用Anti-Strep tag II抗体进行WB检测。

进口T品牌与雅酶PC202的WB对比结果如图1所示，国产B品牌与雅酶的对比结果如图2所示。

结果表明：雅酶PC202的检测结果优于进口T品牌与国产B品牌。

图1   T品牌与雅酶膜蛋白提取结果

图2   B品牌与雅酶膜蛋白提取结果

2.膜蛋白提取结果对比（BCA定量）

分别取5×106个不同种类的细胞，使用T品牌和雅酶PC202所提取的膜蛋白BCA定量结果如图3所示。

结果表明：对于不同种类细胞，雅酶PC202提取的膜蛋白量均高于T品牌。

图3   T品牌与雅酶所提膜蛋白BCA定量结果

3.胞膜蛋白/胞浆蛋白分离结果对比（western Blot)

使用T品牌和雅酶PC202对HEK293细胞进行膜蛋白提取，分离出胞膜蛋白（Membrane proteins）和胞浆蛋白（Cytosolic proteins）组分。用Anti-HSP 90抗体进行WB检测，结果如图4所示。

结果表明：两种试剂盒膜质分离效果均表现良好，在胞膜蛋白组分中仅可检测到极少量胞浆蛋白。

图4   T品牌与雅酶胞膜蛋白/胞浆蛋白分离结果

4.组织样本膜蛋白提取结果（western Blot)

取20mg小鼠心脏组织，用雅酶PC202提取得到胞膜蛋白/胞浆蛋白，使用不同靶标的抗体进行WB检测，检测结果如图5所示。

结果表明：雅酶PC202可以出色地完成从组织样本中提取膜蛋白的工作。

图5 小鼠心脏组织膜蛋白提取结果

常见问题解析：

难提取

膜蛋白通常都具有一定的疏水性和嵌入性，在水溶液中不易稳定存在，特别是跨膜蛋白，其具有多次跨膜结构域，难以提取分离，最终导致WB失败。

解决方案

提取膜蛋白时需要使用去污剂。去污剂也称为表面活性剂，是一类同时具有亲水头部和疏水尾部的分子，能够使脂膜解体释放膜蛋白，并维持去膜状态下膜蛋白结构和功能的稳定性。

低表达

膜蛋白通常表达量比较低，在总蛋白中占比不高，用提取的总蛋白检测时，目标蛋白的含量可能低于WB检测下限，难以检测到。

解决方案

提取内源性的膜蛋白，可以尽可能地增加样本量。对于外源性目标膜蛋白，可通过基因过表达的方法来提高目标蛋白量。

不稳定

温度、pH值、膜组成等因素很容易影响膜蛋白结构的稳定性。膜蛋白在热变性过程中容易发生聚集和沉淀，使条带分子量发生变化或扭曲。

解决方案

提取膜蛋白通常要在4℃，缓冲液pH7.4-8.0的条件下进行。

普通蛋白样品做WB检测通常会进行100℃热变性处理，但膜蛋白具有疏水性，高温加热后易发生聚集并形成二聚体或多聚体，甚至形成沉淀滞留在胶孔中，不能被抗体很好地识别。因此，膜蛋白样品进行WB时通常有以下几种处理方式：

(1)不加热直接上样；

(2)50℃加热样品10min；

(3)37℃处理样品30min。

易降解

受到化学性、物理性和生物性因素等的影响，膜蛋白容易降解，同时也不容易在常温保存。

解决方案

确保提取膜蛋白的溶液中已加入蛋白酶抑制剂，膜蛋白样品短期保存可置于4℃，长期保存应分装置于-80℃，避免反复冻融。

难操作

部分膜蛋白分子量较大，大分子量蛋白进行WB操作时，电泳，转膜等条件需要摸索，较为困难。

解决方案

有些膜蛋白相对分子质量较大，大分子蛋白进行WB时需注意：

(1)分离胶浓度最好选择6%-8%，并小心剥胶；

(2)转膜时间需要相应延长；

(3)转膜液中甲醇含量可适当降低，推荐使用湿法转膜，效率更高。

从动物细胞或组织中方便高效地分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，其可逐步裂解细胞，将完整的细胞核从细胞质中分离出来，然后从细胞核中提取出细胞核蛋白。不含去污剂，能够有效提取细胞核内的可溶性蛋白，但不包括核膜蛋白脱盐或稀释后。

产品特点

• 得率佳——本产品可有效提取细胞核内可溶性蛋白(不包括核膜蛋白)

• 纯度高——核蛋白/浆蛋白分离效果显著，交叉污染率极低(效果优于传统试剂盒)

• 易操作——操作简单，无需梯度超速离心

• 高兼容——本产品提取产物适用于WB、IP、EMSA、Footprinting、报告基因检测及酶活力测定等试验

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从动物细胞或组织中方便高效地分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白， 其可逐步裂解细胞， 将完整的细胞核从细胞质中分离出来，然后从细胞核中提取出细胞核蛋白。含有强效去污剂， 提取的核蛋白不仅包括核膜蛋白， 也包括组蛋白和核内转录因子等可溶性蛋白。

而PC204则在保有PC203得率佳，纯度高，易操作等优点的同时，进一步优化了试剂配方，将提取时间比传统试剂盒缩短了10~20min；

此外虽然PC204只专注于Western Blot的应用，但却使核蛋白提取得率更上一层楼。

产品特点

• 速度快——将核蛋白提取时间控制在10min，提取时间比传统试剂盒缩短10~20min

• 得率佳——优化了细胞核蛋白提取的试剂配方，蛋白提取量高于常规蛋白提取试剂盒，尤其适用于Western Blot实验

• 纯度高——核蛋白/浆蛋白分离效果显著，交叉污染率极低(效果优于传统试剂盒)

• 易操作——操作简单，无需梯度超速离心

实验中的表现：

分别取等量的（2×106个）Expi293F细胞，使用3种不同的试剂盒——雅酶PC203、雅酶PC204和进口T牌按照各自说明书进行细胞核蛋白提取，使用6种不同的细胞核蛋白抗体进行WB检测，以核蛋白为检测指标的WB检测结果如图1所示。

结果表明，PC204的检测结果优于进口T牌（尤其是Lamin A/C、Histone H3、Histone H2A.X和c-Fos）；PC203与进口T牌的检测结果相近，效果相当，但T牌的组蛋白提取效果显著低于PC203与PC204。

图1，不同试剂盒的核蛋白WB检测结果

此外，使用2种不同的细胞浆蛋白抗体进行WB检测，以浆蛋白为检测指标的WB检测结果如图2所示。

结果表明，三种试剂盒的胞浆蛋白提取效果相当，但T牌试剂盒提取的核蛋白中混有少量的胞浆蛋白，而PC203与PC204核质分离效果显著，交叉污染率极低。

图2，不同试剂盒的浆蛋白WB检测结果

总结：

与T牌相比，雅酶PC204提取的核蛋白WB效果显著，核质交叉污染率极低，但仅适用于WB实验；

雅酶PC203提取的核蛋白WB效果与T牌相当，但核质交叉污染率极低，且适用于IP、EMSA、Footprinting等其它实验，所以客户可根据实验目的选择对应的试剂盒。

常见问题解析：

核质分离不彻底，出现交叉污染

可能原因

1.离心方法不适宜，如离心速度或时间不足，导致细胞核与细胞质没有完全分离；

2.细胞裂解过度，导致细胞核结构受损，胞核蛋白与胞质蛋白混在一起；

3.操作不当，如细胞核离心沉淀后，未将上层胞质组分弃尽。

解决方案

1.严格按照说明书操作，采用合适的离心方法；2.

选择合适强度的细胞裂解液，针对组织样本，若使用匀浆法，匀浆次数要适中，切勿过度匀浆；

3.细胞核离心沉淀后，胞质组分要充分去除，可以采取细胞核清洗的方法；

4.确认蛋白定位：有些蛋白既存在于细胞质，也存在于细胞核中（如NF-κB）。

核蛋白提取效率低

可能原因

1.裂解试剂未添加蛋白酶抑制剂或用量不足，导致蛋白质降解；

2.细胞裂解不充分。

解决方案

1.在实验过程中注意蛋白酶抑制剂的使用，确保其在整个提取过程中都有效，以防止蛋白质的降解；

2.在细胞破碎后，进行镜检，确保细胞破碎率达到90%以上。

提取后细胞核蛋白总量低

可能原因

1.蛋白表达水平低；

2.提取前细胞状态差或者组织样本不新鲜，提取方法不当导致蛋白样品降解。

解决方案

1.确认蛋白表达水平：

通常细胞内的蛋白质表达水平受到基因转录和翻译的影响，也会受到外界因素（如药物和病毒感染）的影响，还可能受细胞内的调控机制影响而发生变化。总之，某些核蛋白在特定状况下才会表达，可以借助UniProt、BIOGPS、GEPIA、The Human Protein Atlas等工具查询相关蛋白信息；

2.确保细胞或组织的新鲜度：

对于组织样本，尽量使用新鲜的组织，因为冻存组织可能会影响核蛋白的提取效果和质量。如果必须使用冻存组织，应确保其在冻存过程中没有反复冻融。

对于细胞样本，在收集细胞时要保证细胞的活性和完整性。

3.注意蛋白提取方法：

确保整个蛋白提取过程在低温（如冰浴）条件下进行，且尽可能快速地进行提取操作。

本产品在 60 min 内即可分离出完整的线粒体，获得的线粒体具有完整的双层膜结构和很高的生物学活性，可用 于细胞凋亡、信号转导和代谢研究等下游应用以及线粒体蛋白质组学研究。

产品特点

• 纯度高——利用两步密度梯度离心的原理，提取到的线粒体纯度更高

• 活性高——所提取的线粒体保留有完整的结构，并具有很高的生物学活性

• 应用广——本产品提取的线粒体可应用于：

(1)线粒体的功能或酶活性研究

(2)线粒体蛋白分析：如SDS-PAGE、免疫印迹(WB)、免疫沉淀(IP)、蛋白质组学研究等

(3)线粒体DNA(mtDNA)提取

实验中的表现：

纯度高

市售大部分线粒体提取试剂盒采用一步密度梯度法，得到的多为粗线粒体；而PC205采用两步密度梯度法，所获得的纯线粒体成分更均一，纯度更高。

图1 小鼠肝脏各组分流式分析结果

取100mg小鼠肝脏组织按照说明书操作，获得小鼠肝脏匀浆液、沉淀（含有核、未破碎细胞等）、上清（细胞质相关物质）、粗线粒体、纯线粒体样品。用PBS将各组分稀释100倍后进行流式检测，结果如图1所示：在纯线粒体组分中，具有一类均匀分布的单独集群，表明该组分中具有很高的纯度。

图2 小鼠肝脏线粒体健那绿染色

取100mg小鼠肝脏组织，使用PC205提取线粒体，经健那绿染液染色后，在显微镜下镜检。如图2所示，视野中可观察到蓝绿色线粒体呈现出小棒状或哑铃状，由于肝组织中线粒体含量丰富，线粒体大多呈现聚集状态。

活性高

图3 小鼠肝脏线粒体MitoTracker染色结果

将MitoTracker Red（一种膜电位依赖性线粒体染料）对提取的纯线粒体进行处理，并置于荧光显微镜下观察，结果如图3所示：提取的线粒体悬液经染色后发出红色荧光，说明经PC205提取的线粒体膜电位保存良好，具有很高的活性，适用于进一步的功能研究。

应用广

PC205提取的线粒体可用于线粒体功能研究、线粒体蛋白分析和mtDNA的提取，以下是蛋白分析应用：

图4 线粒体蛋白WB检测

Mt为：使用PC205提取的小鼠肝脏和HEK293细胞线粒体蛋白

Total为：RIRA裂解液提取的肝脏组织和HEK293细胞总蛋白

经BCA法蛋白定量后进行WB检测（上样量：10μg/孔）。

如图4显示，线粒体组分中COX IV和Hsp 60的条带明显强于总蛋白组中的各自条带，说明使用PC205可以很好地富集线粒体蛋白；此外，线粒体组分中没有Lamin A/C和Syntaxin 16的条带，表明提取的线粒体中没有细胞核和高尔基体等其它细胞器的污染。

注意事项：

1.一定要使用新鲜的组织样品，千万别用经冷冻保存过的组织。

2.实验全程低温操作。

3.离心机要求：

① 可4℃控温；

② 最高转速可达21,000×g；

③ 升速快：能在最短的时间内(15sec内)速度升至21,000×g。

4.细胞破碎程度是提取线粒体的关键，若细胞破碎不足会影响线粒体的得率，细胞破碎过度则会影响线粒体结构的完整性。建议提前做预实验探索细胞破碎条件，推荐方案如下：

组织样品采用普通玻璃匀浆器即可满足需求。

细胞样品：

①可选择间隙严密的研杵方能达到破碎效果。匀浆5次后，取匀浆悬液与台盼蓝染液混合，根据破碎情况适当增加匀浆次数；

②可选择超声破碎仪破碎。用最低功率，探索破碎条件，如按照开1sec，关2sec的频率，超声3~5次；

③细胞破碎程度鉴定：要使细胞破碎比例达50%~60%（注意：是破碎比例，并非细胞活率达50%~60%哦，以2×107个细胞为例，破碎后的活细胞数应在8×106至1×107个），可取2~5μL破碎的细胞，使用PBS稀释1倍后测量细胞活率，再计算活细胞数量值。

本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总蛋白。试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液，用户可根据下游实验需求进行选择。

产品特点

• 操作简单快速——最快1min即可得到变性总蛋白

• 无蛋白丢失——可打开DNA双链，高效获取与DNA结合的蛋白

• 小样本量、高得率——最小可处理20μL样本与裂解液混合物，提取的蛋白溶液浓度可达2~8mg/mL

适用多种实验含有两种裂解液，既可用于提取变性蛋白质，也可提取天然蛋白质

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文献列表（部分展示）

• 1)Guo, Y., You, Y., Shang, F. F., Wang, X., Huang, B., Zhao, B., ... & Xia, Y. (2023). iNOS aggravates pressure overload-induced cardiac dysfunction via activation of the cytosolic-mtDNA-mediated cGAS-STING pathway. Theranostics, 13(12), 4229.(IF 12.4)

• 2)Liu, F., Zhang, X., Peng, Y., Zhang, L., Yu, Y., Hua, P., ... & Zhang, L. (2021). miR-24 controls the regenerative competence of hair follicle progenitors by targeting Plk3. Cell Reports, 35(10), 109225.(IF 9.423)

• 3)Qi, F., Wang, Y., Yu, B., & Li, F. (2023). Identification of RECK as a protective prognostic indicator and a tumor suppressor through regulation of the ERK/MAPK signaling pathway in gastric cancer. Journal of Translational Medicine, 21(1), 766.(IF 7.4)

• 4)Zhao, Y., Zhang, M., Dou, Y., Du, K., Liu, X., & Zhao, Y. (2022). DDAH1/ADMA Regulates Adiponectin Resistance in Cerebral Ischemia via the ROS/FOXO1/APR1 Pathway. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2022.(IF 7.31)

• 5)Zhu, L., Li, B., Li, R., Hu, L., Zhang, Y., Zhang, Z., ... & Zhang, X. (2023). METTL3 suppresses pancreatic ductal adenocarcinoma progression through activating endogenous dsRNA-induced anti-tumor immunity. Cellular Oncology, 1-13.(IF 7.051)

RIPA裂解液

RIPA裂解液(RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay)是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要用于从动物细胞和组织中提取可溶性蛋白，其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP及Elisa等实验。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。

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文献列表(部分展示)

• 1)Miao, Z., Li, J., Wang, Y., Shi, M., Gu, X., Zhang, X., ... & **ng, Y. (2023). Hsa_circ_0136666 stimulates gastric cancer progression and tumor immune escape by regulating the miR-375/PRKDC Axis and PD-L1 phosphorylation. Molecular Cancer, 22(1), 205.(IF 37.3)

• 2)Liu, C., Xu, Y., Yang, G., Tao, Y., Chang, J., Wang, S., ... & Zeng, Y. Niche Inflammatory Signal Regulates Periodical Mammary Regeneration and Safeguards Stem Cell Survival Under Cytotoxic Stress. Available at SSRN 4431123.(IF 25.269)

• 3)Liu, C., Xu, Y., Yang, G., Tao, Y., Chang, J., Wang, S., ... & Zeng, Y. A. (2024). Niche inflammatory signals control oscillating mammary regeneration and protect stem cells from cytotoxic stress. Cell Stem Cell, 31(1), 89-105.(IF 23.9)

• 4)Chen, X. Y., Li, B., Wang, Y., Jin, J., Yang, Y., Huang, L. H., ... & Tao, Z. H. (2023). Low level of ARID1A contributes to adaptive immune resistance and sensitizes triple‐negative breast cancer to immune checkpoint inhibitors. Cancer Communications.(IF 16.2)

• 5)You, L., Dou, Y., Zhang, Y., Xiao, H., Lv, H., Wei, G. H., & Xu, D. (2023). SDC2 Stabilization by USP14 Promotes Gastric Cancer Progression through Co-option of PDK1. International Journal of Biological Sciences, 19(11), 3483-3498.(IF 16.2)

蛋白酶/磷酸酶抑制剂

蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合液可在原代细胞、哺乳动物培养细胞、动物组织、植物组织、酵母或细菌的提取或裂解过程中有效保护蛋白质。

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文献列表(部分展示)

• 1)Ding, P., Yang, R., Li, C., Fu, H. L., Ren, G. L., Wang, P., ... & Li, Y. H. (2023). Fibroblast growth factor 21 attenuates ventilator-induced lung injury by inhibiting the NLRP3/caspase-1/GSDMD pyroptotic pathway. Critical Care, 27(1), 1-15.(IF 19.334)

• 2)Zhang, C., Teng, Y., Li, F., Ho, W., Bai, X., Xu, X., & Zhang, X. Q. (2023). Nanoparticle-Mediated RNA Therapy Attenuates Nonalcoholic Steatohepatitis and Related Fibrosis by Targeting Activated Hepatic Stellate Cells. ACS nano.(IF 17.1)

• 3)Yan, J., Tang, Z., Li, Y., Wang, H., Hsu, J. C., Shi, M., ... & Qu, J. (2023). Molybdenum Nanodots for Acute Lung Injury Therapy. ACS nano, 17(23), 23872-23888.(IF 17.1)

• 4)Hu, Z., Wang, D., Gong, J., Li, Y., Ma, Z., Luo, T., ... & Song, Z. (2023). MSCs Deliver Hypoxia‐Treated Mitochondria Reprogramming Acinar Metabolism to Alleviate Severe Acute Pancreatitis Injury. Advanced Science, 2207691.(IF 15.1)

• 5)Zheng, J., Zhang, Q., Zhao, Z., Qiu, Y., Zhou, Y., Wu, Z., ... & Jiang, X. (2023). Epigenetically silenced lncRNA SNAI3-AS1 promotes ferroptosis in glioma via perturbing the m6A-dependent recognition of Nrf2 mRNA mediated by SND1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 42(1), 1-20.(IF 12.658)

免疫(共)沉淀裂解液

免疫(共)沉淀裂解液主要用于在非变性条件下从细胞和组织中提取可溶性蛋白，其裂解得到的蛋白样品尤其适用于免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于PAGE、Western Blot及Elisa等实验。

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文献列表(部分展示)

• 1)Jiang, K., Yin, X., Zhang, Q., Yin, J., Tang, Q., Xu, M., ... & Yan, S. (2023). STC2 activates PRMT5 to induce radioresistance through DNA damage repair and ferroptosis pathways in esophageal squamous cell carcinoma. Redox Biology, 60, 102626.(IF 11.4)

• 2)Wang, Y., Liu, Q., Chu, C., Li, L., Wang, Z., Liu, Q., ... & Ma, J. (2023). Six first-line tyrosine kinase inhibitors reveal novel inhibition potential for the EGFR S768I mutation. Toxicology and Applied Pharmacology, 461, 116385.(IF 3.8)