MBL：技术丨MHC四聚体助力CTL的可视化研究

诺扬生物
2024-05-24

我们知道，T细胞上表达的T细胞受体(T cell receptor, TCR)可以特异性识别MHC分子与多肽片段的复合物(MHC/peptide complex)，并与其结合。MHC四聚体就是依据这种抗原特异性识别的原理而开发出来的试剂，可以通过流式细胞检测对CD8阳性或CD4阳性的T细胞进行检测。除此之外，MHC四聚体试剂还可以发挥类似于抗体的作用，对目标CTL进行特异性标记，以供研究者进行可视化研究。

MHC四聚体助力CTL可视化研究


人类嗜T淋巴细胞病毒I型(human T-lymphotropic virus type-1，HTLV-1)是一种反转录病毒，能引发成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL/L)、脊髓病/热带痉挛性瘫痪(HAM/TSP)及多发硬化症(MS)等疾病。HAM/TSP是一种HTLV-1诱导的中枢神经系统炎症性疾病，患者外周血中活化的HTLV-1病毒特异性CD8阳性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)显著增加。

在一项研究中，Matsuura.E等人评估了3名HAM/TSP患者脊髓中HTLV-1特异性CTL的浸润和HTLV-1蛋白的表达，发现HTLV-1特异性CTL的频率超过浸润CNS的CD8阳性细胞的20%。研究结果已发表在Matsuura E, et al. Visualization of HTLV-1-specific cytotoxic T lymphocytes in the spinal cords of patients with HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis. J Neuropathol Exp Neurol. 2015;74(1):2–14.上。

在此研究中，Matsuura. E等人使用由MBL公司生产的PE标记的HLA-A*02:01/Tax11-19四聚体(MBL Code No. TS-M017-1)和HLA-A*24:02/Tax301-309四聚体(MBL Code No. TS-M018-1)，对HAM/TSP患者PBMC和中枢神经系统样本进抗体行染色。通过共聚焦激光扫描显微镜可以观察到HTLV-1四聚体与CD8双染的HTLV-1特异性CTL；而在脊髓实质和脊髓软脑膜中也可以检测到HTLV-1四聚体阳性细胞的存在。



图1：检测外周血单核细胞(PBMC)和中枢神经系统中CD8阳性的人类嗜T淋巴细胞病毒1型(HTLV-1)Tax特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。图中白色条和黑色条分别表示20μm和100μm。

  1. 一位HAM/TSP的患者的PBMC被用来进行原位四聚体染色。使用抗CD8抗体（红）、HLA-A*02:01/Tax11-19或HLA-A*24:02/Tax11-19四聚体（绿）对细胞染色，并使用DAPI复染细胞核，其后使用Confocal进行观察。右列为所有通道Merge结果，可见CD8/四聚体双阳性细胞为黄色。

  2. HLA-A*02:01/Tax11-19四聚体阳性细胞散布在脊髓实质中（患者8624）。

  3. 在脊髓实质中可见HLA-A*24:02/Tax301-309四聚体阳性细胞（患者6315）。

  4. 在脊髓软脑膜（患者8624）的血管周围发现用HLA-A*02:01/Tax11-19四聚体染色的细胞（红色）。

  5. 在邻片中未检测到HLA-A*02:01/HIV Gag四聚体阳性细胞。

接着，Matsuura. E等人用同样的方法检测脊髓中的CTL，获得了不同患者浸润到中枢神经系统中HTLV-1特异性CTL在CD8阳性细胞中出现的频率。

图2：CD8阳性淋巴细胞中人嗜T淋巴细胞病毒1型(HTLV-1)Tax特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的频率。使用抗CD8抗体（红）、HLA-A*02:01/Tax11-19或HLA-A*24:02/Tax11-19四聚体（绿）对细胞染色，并使用DAPI复染细胞核，其后使用Confocal进行观察。右列为所有通道Merge结果，可见CD8/四聚体双阳性细胞为黄色。(A-C)3名HAM/TSP患者的脊髓用四聚体染色。被四聚体染色的CTL完全呈CD8阳性，箭头指示CTL。图中白色条表示20μm。

  1. A：使用HLA-A*02:01/Tax11-19四聚体和抗CD8 mAb进行双重染色（患者 8624）。在脊髓实质中观察到HTLV-1-特异性CTL，占视野中CD8阳性细胞的29% 。

  2. B：使用HLA-A*24:02/Tax301-309四聚体和抗CD8 mAb进行双重染色（患者6315）。CTL占视野中CD8阳性细胞的25%。

  3. C：使用HLA-A*24:02/Tax301-309四聚体和抗CD8 mAb进行双重染色（患者 6664）。CTL在血管周围区域可见，占视野中CD8阳性细胞的11%（9个中的1个）。

  4. D：对患者6315进行HLA-A*24:02/HIV Gag四聚体（对照四聚体）和CD8双重染色。没有细胞被四聚体染色。

TIPS


我们注意到，Matsuura. E等人使用HTLV-1四聚体对样本进行染色时，是在4℃下进行的，获得了比较好的染色效果。这里也建议各位老师在4℃的条件下对样本进行染色，尤其是样本为活细胞时，这样可以避免细胞将四聚体内吞而造成的假阳性染色。

MBL可提供MHC四聚体商品化产品及定制服务


Matsuura. E等人使用MBL生产的HTLV-1四聚体及CD8单克隆抗体，成功检测到中枢神经系统中浸润的HTLV-1特异性CTL，为MHC四聚体可以应用于抗原特异性CTL的可视化研究提供了证据。

MBL北京细胞治疗技术研发中心成立于2023年6月，隶属于北京博尔迈生物技术有限公司，占地面积超过1000平方米，深度开展MHC四聚体等产品在中国区的研发及生产并根据客户需求提供定制产品和实验服务。如您对我们的四具体相关产品感兴趣，欢迎留言或拨打下方400产品电话联系我们。



阅读39
分享